家猪13/17罗伯逊易位染色体着丝粒的研究
目 录
摘 要 1
ABSTRACT 2
英文缩写词表 3
引 言 4
第一章 文献综述 6
1 着丝粒的研究进展 6
1.1 着丝粒的生物学功能 6
1.2着丝粒DNA特点 6
1.3 着丝粒中的重复序列 7
1.4着丝粒蛋白 7
2 罗伯逊易位的研究进展 8
2.1罗伯逊易位 8
2.2罗伯逊易位对携带者的影响 9
2.3国内长白猪13/17罗伯逊易位的发现 9
2.4罗伯逊易位的理论研究 10
3荧光原位杂交技术研究进展 11
3.1荧光原位杂交 11
3.2荧光原位杂交技术的发展 11
3.2.1多色荧光原位杂交 11
3.2.2染色体描绘 11
3.2.3 间期细胞染色质纤文杂交 12
3.2.4比较基因组杂交（CGH） 12
3.3 荧光原位杂交技术在罗伯逊易位研究中的应用 12
第二章 猪13/17罗伯逊易位染色体着丝粒区域DNA文库的构建 14
1 试验材料 14
1.1 主要仪器及试剂 14
1.2主要试剂的配制 14
2试验方法 15
2.1染色体标本的制备 15
2.1.1 综合培养基的分装 15
2.1.2 采血 15
2.1.3 淋巴细胞培养 15
2.1.4 秋水仙素处理 15
2.1.5 标本片制作与观察 15
2.1.6 染色体核型鉴定 16
2.2 显微切割获得13/17易位染色体着丝粒区域 16
2.3着丝粒区域DNA文库的构建 16
2.3.1 DOP-PCR扩增 16
2.3.2 PCR 产物纯化 16
2.3.3 PCR产物克隆连接反应 16
2.3.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 17
2.3.5转化及阳性克隆的初步筛选 17
2.3.6菌液PCR鉴定 18
2.3.7 克隆子序列分析 18
3 结果与分析 18
3.1显微切割获得13/17易位染色体着丝粒区域 18
3.2 DOP-PCR产物检测结果 19
3.3菌液PCR结果 19
3.4 序列分析结果 20
4. 讨论 22
4.1染色体显微切割 22
4.2 DOP-PCR方法 22
第三章 13/17罗伯逊易位染色体着丝粒特异性探针筛选 23
1 试验材料 23
1.1 主要试剂及仪器 23
1.2主要试剂的配制 23
2 试验方法 24
2.1探针的标记 24
2.2 探针纯化 24
2.3探针标记效率检测 24
2.4 荧光原位杂交 25
2.4.1染色体标本片的预处理 25
2.4.2 探针的变性 25
2.4.3 杂交 25
2.4.4 杂交后的处理 25
2.5 杂交后的观察 26
3.实验结果与分析 26
3.1地高辛标记检测结果 26
3.2荧光原位杂交结果 27
4.讨论 27
4.1探针标记方法 27
4.1.1切口平移法 27
4.1.2 随机引物法 28
4.1.3末端标记法 28
4.2影响杂交的因素 28
4.2.1探针长度 28
4.2.2探针浓度 28
4.2.3杂交温度 28
4.2.4杂交时间 28
结论 29
参考文献 30
致 谢 35
CONTENTS
Chinese abstract 1
Abstract 2
English Abbreviation key 3
Summary preface 4
Chapter one Summary 6
1 Progress of centromere 6
1.1 Biological function of centromere 6
1.2 Feature of centromere DNA 6
1.3 Repeated sequence of centromere 7
1.4 Centromere protein 7
2 General situation of robertsonian translocation 8
2.1 Robertsonian translocation 8
2.2 Effects of carriers by Robertsonian translocation 9
2.3 Discover of domestic 13/17 Robertsonian translocation 9
2.4 Research of Robertsonian translocation 10
3 Progress of FISH 11 毕业论文http://www.751com.cn/ 论文网http://www.751com.cn/
3.1 FISH 11
3.2 Development of FISH 11
3.2.1 M—FISH 11
3.2.2 Chromosome painting 11
3.2.3 Fiber-FISH 12
3.2.4 Comparative genomic hybridization 12
3.3 Application of FISH in Robertsonian translocation 12
Chapter two DNA library of swine13/17Robertsonian translocation chromatosome 14
1 Material 14
1.1 Main equipment and reagent 14
1.2 The main reagent preparation 14
2 Method 15
2.1 Chromosome preparation 15
2.1.1 Allocation of synthetic medium 15
2.1.2 Cull blood 15
2.1.3 Cultivation of lymphocyte 15
2.1.4 Treat by colchicine 15
2.1.5 Manufacture of specimen slide 15
2.1.6 Identification of karyotype 16
2.2 Microdissection 16
2.3 DNA library of centric region 16
2.3.1 DOP-PCR amplification 16
2.3.2 Purification of PCR product 16
2.3.3 PCR product clone and coupled reaction 16
2.3.4 Preparation of E coli Competent 17
2.3.5 Transformation and bolting the masculine clone 17
2.3.6 Bacterium liquid PCR 18
2.3.7 Sequence analysis 18
3 Results and analysis 18
3.1 Microdissection 18
3.2 DOP-PCR detection 19
3.3 Bacterium liquid PCR 19
3.4 Sequence analysis result 20
4. Discussions 22
4.1Microdissection 22
4.2 DOP-PCR method 22
Chapter three Bolting Specificity sequence of 13/17 Robertsonian translocation chromosome 23
1 Materials 23
1.1 Main equipment and reagent 23
1.2 The main reagent preparation 23
2 Method 24
2.1 Labeling probe 24
2.2 Purification of probe 24
2.3 Detection after labeling probe 24
2.4 FISH 25
2.4.1Pretreatment of chromatosome 25
2.4.2 Probe denaturization 25
2.4.3 Hybridisation 25
2.4.4 Treatment after hybridisation 25
2.5 Detection after hybridisation 26
3. Results and analysis 26
3.1 Detection results 26
3.2 FISH results 27
4. Discussions 27
4.1 Method of probe labelling 27
4.1.1 Nick translation 27
4.1.2 Random Primer 28
4.1.3 End-labelling 28
4.2 Hybridisation factor 28
4.2.1 Length of probe 28
4.2.2 Concentration of probe 28
4.2.3 Hybridization temperature 28
4.2.4 Hybridization time 28
Conclusion 29
Reference 30
Acknowledgments 1241
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