b.加富培养基 (1):多性蛋白脐10g.葡萄糖50g.磷酸氢二钾1g.硫酸镁0.5g.活蚕蛹30g.生长素0.5μg.琼脂20g.加水1000mL.pH:5.0.
加富培养基 (Ⅱ):蛋白脯40g.葡萄糖40g.去皮鲜马铃薯100g.磷酸氢二钾1g.硫酸镁0.5g.牛肉膏10g.生长素0.5μg.蝠蛾活幼虫 (磨碎)30g.琼脂20g.高寒草甸土浸出液10OOmL.pH:5.0.
在加富培养基上.菌落比在PDA培养基上生长旺盛和迅速,加富Ⅱ号又优于Ⅰ号.
2.生长特性 冬虫夏草菌的分离培养中须掌握温度.pH值.光照.碳和氮源及无机盐的利用状况.
(1)不同温度对菌丝生长的影响.冬虫夏草菌喜偏低温度.在0一4℃时能缓慢生长,5一8℃时生长速度加快,10一19℃是此菌较适生长发育的范围,最佳生长温度为15一l9℃.超过20℃菌丝猛长.菌落由白色变为灰黑或棕黄色.开始出现变异.所以不宜高温培养.
(2)对pH值的要求.冬虫夏草菌是一种偏酸性真菌.最适pH值为5.0一6.0.当pH值为4.5以下和6以上时.随着增高或降低.生长缓慢至不生长.
(3)光照的影响.此菌的子囊孢子萌发和菌丝生长初期.适应于弱光和短光照.后期则适应于较强光照.在人工培养中.菌丝.分生孢子和子座等具有明显的趋光性.向阳面生长多而密.背光面生长稀疏.全黑环境下培养的各种菌态纤弱.细长.稀疏.论文网http://www.751com.cn/
(4)对碳源的利用.冬虫夏草菌可利用多种碳源.但以葡萄糖和麦芽糖合用时生长最快.单用葡萄糖时也能良好地生长.次之是马铃薯等淀粉.再次之是蔗糖.
冬虫夏草菌是一种由寄生活体寄主.再由腐生阶段发育成熟的真菌.所以对氮源中的多种有机氮均能较好的利用.而以活虫体最佳,蛋白胨与酵母膏合用生长也十分理想.次之是二者单独使用.再次之是牛肉膏等.而对无机氮如硫酸铵.硝酸钾等利用较差.
对灰分养料有一定的需求.在有微量的硫酸镁.磷酸氢二钾的培养基中生长旺盛.次之是磷酸二氢钾.其他钠.钙.铁.铜等无机盐也可利用.
3.培养方式 冬虫夏草菌分离纯化后.即可作为各种实验和扩大生产应用.
(1)其扩大生产的方法常有三种:固体静置培养法.振荡培养法和大罐通气发酵培养法.
a.静置培养:主要用在固体培养.如试管斜面.三角瓶培养.米饭培养等等.在静置培养中只要掌握好温度和光照即可使菌正常生长.当斜面上的分生孢子成熟后.即可存入1一2℃的冰箱中保存8一14个月.也可作为种子直接用于生产.
b.振荡培养:采用液体培养菌种或小规模繁殖培养.都可用振荡培养.振荡培养的培养基.把固体培养基减去琼脂即可.设备最好选用恒温振荡培养机.用三角瓶置液体培养基.把试管固体菌种接入即可培养.经不断振荡使液体培养基中各种成分混合均匀而不致沉淀.同时促进气体与液体接触和交换.使氧进入液体培养基中.利于菌丝生长和分生孢子形成.
c.大罐通气发酵培养:在大规模生产菌丝和分生孢子等菌粉时.必须用大罐通气发酵培养法.该方法通气是采用吸气或真空泵减压等方法.经过滤器除杂菌.送入罐内液体培 养基中供冬虫夏草菌的生长发育.