冬虫夏草菌罐中发酵要求温度在20一25℃.罐压392.3一686.5kPa(0.4一0.7kg/cmz).通气量为0.5一1.OVVm＊,注入发酵罐中的液体培养基为罐容的65%一75%为宜. 接种量为10%.搅拌速度为180r/min.培养时间72一96h.即可放罐浓缩和喷粉.
(3)发酵培养基多用.鲜马铃薯 (去皮)8%.蔗糖2%.玉米淀粉0.5%.蚕蛹粉1%.蛋白胨0.4%.硫酸铵0.2%.pH值5.5一6.0.
(4)发酵培养成品标准.分生孢子即几全脱落母体孢子梗.孢子梗数量增加不明显 时.在镜下计数检查.每毫升含分生孢子18亿一25亿个,残糖低于1%,氨基氮低于0.2mg/mL.即可成为成品菌液.
4.冬虫夏草菌回接要点 把有性型或无性型的冬虫夏草菌孢子回接到寄主昆虫体上.是人工培养有性型冬虫夏草和复壮无性型菌种的关键措施.
(1)回接时期.冬虫夏草回接关键在于选择寄主昆虫抗菌薄弱时期.一是蜕皮期,二是幼虫取食活动激烈.摩擦损伤率较高时期.
(2)回接方法.又分两种.论文网http://www.751com.cn/
a.喷雾法:当饲养的蝠蛾幼虫达4一6龄虫.有1/3以上的幼虫蜕皮时.把幼虫集中.用子囊孢子或者分生孢子对入5%一10%葡萄糖液喷雾到虫体或食物上.接种后约30min.菌液在虫体上略干.把幼虫放回土壤中任其自然生活.此法感病率高.但缺点是.幼虫不易从土中取出集中.而且集中时幼虫有互相残杀的习性.虫体被咬伤后.易被杂菌感染致死.冬虫夏草菌丝未充满体腔时.伤虫就会腐烂.不能形成僵虫 (菌核).
b.自然接触法:在大面积半自然土壤中饲养蝠蛾幼虫.定时取小样观察幼虫生长状况.当大部分幼虫适宜感病时.用饲料植物浸菌液种植和用细土拌菌接种.均匀撒入养虫的地表上.然后喷水.使菌渗入土中.幼虫取食活动时接触感染.此法寄主感染率不太高.但一经感染致病.冬虫夏草菌长势好.而且未感病的蝠蛾幼虫能正常生长.繁殖后代.