白粉病菌(powdery mildew)属于子囊菌亚门(Ascomycotina)，核菌纲(Pyrenomycetes)，白粉菌目(Erysiphales)，白粉菌科(Erysiphaceae)，包括1个科，21个属和500多个种。白粉病菌能够感染近万种植物，是一种广泛存在的的植物病原体[1-2]。白粉病菌具有发达的菌丝，其菌丝体在寄主植物的茎和叶表面繁殖，其生长依靠在寄主表皮细胞中产生吸器来吸取寄主植物的营养以及水分[3-4]。目前已报道的Oidium属的番茄白粉病菌有两个种：Oidium lycopersici和Oidium neolycopersici，其中O. 1ycopersici产生分生孢子为链式，主要分布在大洋洲[5]；而O. neolycopersici产生分生孢子为非链式，主要分布在亚洲、南北美洲、欧洲和非洲[6]。本研究所使用的番茄白粉病菌为O. 1ycopersici。
番茄白粉病菌主要寄生在番茄叶片上，起初在叶表面出现白色霉点，之后会逐渐扩展为霉斑进而连成一片，使整个叶面布满白色粉状物，后期白色霉斑区会出现许多黑色小颗粒。番茄白粉病可严重威胁番茄的产量和质量，迄今为止，抗病育种仍然是控制白粉病病害的主要措施。研究表明，植物病原真菌的生长、发育和致病性均受到真菌的细胞外信号转导途径的调控。目前发现的植物病原真菌信号转导途径主要有Ca2+途径、MAPK途径和cAMP途径等三类[7]。
1965年，Ebashi等学者首先提出细胞内存在介导钙信号的钙结合蛋白，随后Cheung等学者发现了磷酸二酯酶激活蛋白，它能结合Ca2+并普遍存在于所有真核生物中[8]。1978年，Cheung等学者将这类蛋白因子命名为“钙调蛋白”(Calmodulin, CaM)。目前Ca2+被普遍认为是细胞复杂调控系统中的一个中心成分。迄今为止，越来越多物种(包括动物、植物和微生物等)的CaM基因被分离克隆出来[9-11]，并且发现它在进化上极其保守，但是目前关于番茄白粉病菌钙调蛋白的研究尚无报道。本研究成功克隆番茄白粉病菌CaM基因的部分序列并对其做系统发育分析，为以后对O. 1ycopersici钙调蛋白作用机制的研究奠定基础本文来自辣~文\论|文/网，
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1. 材料与方法
1.1 实验材料及试剂
1.1.1 供试材料
番茄白粉病菌来自周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室人工气候箱，大肠杆菌DH5α为周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室保存，pMD18-T载体购自宝生物工程(大连)有限公司(TaKaRa)。
1.1.2 主要试剂
2×Taq Master Mix购自宝生物工程(大连)有限公司(TaKaRa)；SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒购自生工生物工程(上海)有限公司；高纯度质粒小量快速提取试剂盒购自北京艾德莱生物科技有限公司；其它常用试剂为进口或国产分析纯。
2% CTAB抽提液：100mM Tris-HCl(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，1.5M NaCl，2% CTAB(W/V)，4% PVP40(W/V)，高压灭菌，使用前加入2% β-巯基乙醇(V/V)；10% CTAB抽提液：100mM Tris-HCl(pH 8.0)，20mM EDTA(pH 8.0)，1.5M NaCl，10% CTAB(W/V)，4% PVP40(W/V)，高压灭菌，使用前加入2% β-巯基乙醇(V/V)。
1.1.3 主要仪器
Centrifuge 5424型离心机和BioPhotometer Plus核酸蛋白测定仪均为德国艾本德(Eppendorf)公司产品，Tanon-2500型凝胶成像系统为上海天能科技有限公司产品，温度梯度PCR仪为德国Biometra公司产品，SCW-CJ-2FD型洁净工作台为苏州宏瑞净化科技有限公司产品。
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