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番茄白粉病菌钙调蛋白基因的克隆与分析 第5页

更新时间:2016-9-11:  来源:毕业论文
注:M:DL2000/5000 Marker;2、5、9:阴性对照;1、3、4、6、7、8:重组载体
2.4 重组载体的测序结果
将重组的阳性质粒送至南京金斯瑞生物科技有限公司进行测序,通过单向测序结果证实,644bp的序列为CaM基因,300bp和950bp的序列均为番茄红素基因(如图4),并得到番茄白粉病菌CaM基因部分序列(图5)。

图4 重组阳性质粒在NCBI中的比对结果
注:A:300bp序列;B:644bp序列;C:950bp序列

图5 番茄白粉病菌CaM基因部分序列
2.5 系统发育树的构建
将该研究中得到的番茄白粉病菌钙调蛋白基因CaM的序列在NCBI的Blast数据库上比对,搜索同源性较高的序列,并建立系统进化树(图6)。由图可知,物种的进化导致不同物种的钙调蛋白基因序列具有一定的差异性。番茄白粉病菌钙调蛋白与核腔小麦白粉病菌钙调蛋白(Accession number: XM-001941096)聚在了同一支上,序列保守性较强,说明这两种白粉病菌钙调蛋白具有很高的亲缘关系。而番茄白粉病菌钙调蛋白与文昌鱼钙调蛋白(Accession number: AJ001919.1)聚在不同的两支,表明二者的同源性非常低。

图6 根据CaM序列构建的Neighbor-joining系统进化树
3. 讨论
钙调蛋白是一种耐热的小分子量酸性蛋白质[15],并且还是植物细胞第二信使系统的重要组成部分[16],其与Ca2+结合后作用于靶酶,从而改变细胞功能和酶的活性[17]。钙调蛋白广泛存在于各种真核生物细胞中,是Ca2+的受体蛋白,对任何微量的钙都能敏感地捕获,通常是以Ca2+-CaM复合物形式参与多种生化反应,从而参与细胞的调节[18]。因此,钙调蛋白作为第二信使在植物信号转导中的作用一直是植物生理、细胞生物学和发育生物学研究的热点。

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