图5 15d后各处理下的幼苗高度
2.7 秋水仙素不同处理浓度与处理时间对蚕豆幼苗胚根数量的影响
秋水仙素不同处理浓度与处理时间对蚕豆胚根数量的影响分析结果见表1、表2、表3。由表1、表2、表3知，经秋水仙素处理10d和15d后，胚根数量在各处理时间之间、各处理浓度之间以及“时间×浓度”之间差异不显著，但对照组与各处理组之间达到极显著差异，即在秋水仙素处理下，蚕豆幼苗胚根生长严重受到抑制。这与张素芝等[20]研究结果相似。
表1 秋水仙素不同处理时间和处理浓度下各变量的方差分析
变异来源 诱导时间 诱导浓度 诱导时间×诱导浓度
根尖诱导率（%） 0.000 0.000 0.007
胚根膨大率（%） 0.000 0.000 0.000
气孔数量（个） 0.000 0.000 0.006
10d后胚根数量 0.168 0.000 0.315
15d后胚根数量 0.738 0.000 0.870
10d后幼苗高度（cm） 0.185 0.000 0.059
15d后幼苗高度（cm） 0.635 0.000 0.793
注：α=0.05
表2 秋水仙素不同处理时间下各变量的多重比较
时间(h) 根尖诱导率（%） 胚根膨大率（%） 气孔数量(个) 10d后胚根的数目（条） 15d后胚根数目（条） 10d后幼苗高度（cm） 15d后幼苗高度（cm）
12 0.3400C 0.3257D 4.2239A 3.6000A 4.3200A 2.3228A 3.6432A
24 0.4768B 0.4128C 4.2032A 4.2100A 4.5200A 2.5862A 3.7859A
48 0.5632A 0.5139B 3.8931B 3.7000A 4.2900A 2.6345A 3.6854A
60 0.5721A 0.6231A 3.8276B 4.3500A 4.4300A 2.2789A 3.3253A
注：α=0.05
表3 秋水仙素不同处理浓度下各变量的多重比较
秋水仙素诱导浓度(%) 根尖诱导率（%） 胚根膨大率（%） 气孔数量(个) 10d后胚根 数目（条） 15d后胚根 数目（条） 10d后幼苗高度（cm） 15d后幼苗高度（cm）
0.000 0.0000D 0.0000C 5.9233A 18.2700A 20.6200A 4.4300A 7.1300A
0.025 0.5738B 0.6243A 3.7942B 1.2800B 1.2300B 3.2300B 4.3250B
0.050 0.6400A 0.6132A 3.5645C 1.4000B 1.3600B 2.5543C 3.4357BC
0.100 0.6683A 0.6265A 3.5350C 1.1000B 1.0000B 1.8900D 2.6738CD
0.150 0.5235BC 0.4932B 3.6951BC 1.1200B 1.0700B 1.5800D 2.3172DE
0.200 0.4632C 0.4932B 3.6638BC 1.1600B 1.2100B 1.0600E 1.6234E
注:α=0.05
2.8 秋水仙素诱导蚕豆多倍体的最佳“处理时间×处理浓度”组合的确定
秋水仙素诱导蚕豆多倍体的处理浓度和处理时间之间的互作见表1。由表1可以看出，在2种因素共同作用下，根尖诱导率和胚根膨大率与对照相比均达到极显著的水平，再结合多重比较结果，确定秋水仙素诱导蚕豆多倍体的最适处理时间为48 h，最佳处理浓度为0.100%。
3. 结论与讨论
本实验结果表明，在秋水仙素处理下，蚕豆根尖诱导率、胚根膨大率升高，根尖细胞染色体数目增多，气孔数量减少，保卫细胞变大，胚根数量减少，幼苗高度降低。蚕豆根尖诱导率、胚根膨大率、气孔数量在秋水仙素不同处理浓度、不同处理时间、不同“处理时间×处理浓度”组合之间差异显著；胚根数量、幼苗高度在秋水仙素不同处理时间、不同“处理时间×处理浓度”组合之间差异不显著，但不同处理浓度之间差异显著；秋水仙素诱导蚕豆多倍体的最适处理时间为48 h，最佳处理浓度为0.100%。
秋水仙素是一种作用于微管的特异性生物碱，秋水仙素能抑制有丝分裂，破坏纺锤体，使染色体停滞在分裂中期，秋水仙素有剧毒，处理太长时间会对处理的植物产生毒害作用，但秋水仙素不论是破坏还是抑制纺锤体的形成，作用都是一时的，去除秋水仙素后细胞可以恢复正常的分裂[21]。从实验结果可以看出，当秋水仙素处理浓度一定时，植株细胞加倍率会随处理时间的延长呈现上升的趋势，在处理时间一定时，细胞染色体的加倍率会随浓度的上升而呈现出先上升后下降的趋势，所以应权衡诱导时间和诱导浓度之间的平衡，选择最适宜的组合进行处理。
本实验中秋水仙素溶液处理蚕豆胚根的最佳浓度是0.100%，最佳时间是48 h，这是因为秋水仙素对植株细胞有一定的毒害作用，诱导浓度过大或诱导时间过长都会影响到植株的正常生长，既不会诱导发芽，也不会诱导膨大。在多倍体诱导的细胞学鉴定过程中染色体会加倍，在二倍体的基础上出现了四倍体和八倍体，这是因为秋水仙素抑制了纺锤丝的形成，导致染色体不能移向两级，故出现了染色体加倍的情况[21]。表型特征反应遗传特征，表型变异特征可作为鉴定的一个形态学指标来反应遗传特征[22]。用秋水仙素处理后，保卫细胞数量减少，体积变大。这是因为秋水仙素诱导染色体加倍，细胞核的体积增大，各种细胞器也随之增大，故保卫细胞增大。秋水仙素浓度过高时会抑制胚根的形成和发育从而影响胚根的数量，而胚根的数量和植物吸收矿质元素息息相关，会影响到植株的生长发育，处理组的苗高和胚根数量明显低于空白组，是因为有些残留在组织内的秋水仙素比较容易向植物分生组织中运输积累，抑制了茎的分生生长。但仍需进一步研究的是这些形态变异是否会影响到多倍体植株的生殖发育，是否能形成稳定的多倍体后代。
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