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蕃茄白粉病菌的鉴定及进化分析 第2页

更新时间:2016-9-21:  来源:毕业论文
引言
    白粉病是一种常见的真菌性病害,引起该病的病原菌属于粉孢属真菌,已经成为无公害蔬菜的大敌,番茄(Tomato)别名西红柿、洋柿子,古名辣月柿、喜报三元,在秘鲁和墨西哥,最初称之为“狼桃”,果实营养丰富,具特殊风味,可以生食、煮食、加工制成番茄酱、汁或整果罐藏。番茄是全世界栽培最为普遍的果菜之一,美国、苏联、意大利和中国为主要生产国,在欧、美洲的国家、中国和日本有大面积温室、塑料大棚及其他保护地设施栽培,中国各地普遍种植,栽培面积仍在继续扩大。蕃茄白粉病多在蕃茄生育中、后期发生,中、本文来自辣-文^论~文/网,毕业论文 www.751com.cn 加7位QQ324,9114找源文下部叶片先发病,逐渐向上部叶片蔓延,严重时除顶叶外全部叶片发病,初期在叶面上出现少量点发状的白色细丝状物,发展后成为形状及其大小不一的白色粉斑,白色粉斑继续扩展或合并,致使整个叶片布满白粉,抹掉白粉可见病部组织褪绿,重病叶的叶片正、背面均布满白粉,终使叶片黄枯,植株提早拉秧。本研究以蕃茄为研究材料,对周口地区番茄白粉菌进行形态学及分子生物学鉴定,以期发现白粉病的新动态,为进一步的番茄白粉菌系统进化研究奠定基础。
    番茄制品是世界公认的营养健康食品,里面含有丰富的蕃茄素,其具有防癌抗癌、延缓衰老等功效,并对由于运动引起的哮喘病等疾病有潜在的治疗效果。2006年,我国番茄酱出口数量为62.98吨,出口的总金额可达3.56亿美元,蕃茄已经成为中国出口创汇的重要产品之一。近年来,由于蕃茄的大面积的种植,一些真菌性病害和一些细菌性病害的发病和危害年年逐渐加重,其中,番茄白粉病严重影响了蕃茄的质量和产量,尤其是在温室生产中的蕃茄影响更为严重些,致使在防治时不得不使用大量的农药产品,使得防治成本升高,环境污染严重,另外,白粉病菌在露地和保护地都能发生,保护地发病更为严重,流行较快,损失较大。
1.实验部分
1.1实验材料
    选用的蕃茄白粉菌于2013年4月取自周口师范学院温室种植的蕃茄白粉病感染叶片。
1.2病菌显微形态鉴定
    对不同时期的感染叶片的菌落颜色、形状和大小进行观察,然后取叶片的感染部位,经过一系列的乙醇脱水、醋酸异戊醇置换、二氧化碳临界点干燥及真空镀膜后,用Quanta200型扫描电镜进行观察。
1.3病菌分子生物学鉴定
1.3.1白粉病DNA的提取 
    用毛刷轻轻刷取感染的叶片,使菌丝和孢子落在含有TE缓冲液的培养皿中,12000r/min离心收集菌体,采用CTAB法提取DNA:1、取两片幼嫩新鲜叶片,置于预冷的研钵中,倒入适量液氮,迅速研磨成粉末状,随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50μL抗氧化剂2-巯基乙醇,继续研磨成略有流动性的糊状或粥状,转入1.5ml的离心管中,于65℃水浴锅中保温约60min。2、待混合物冷却至室温后加入等600μL的氯仿-异戊醇(V:V=24:1)溶液混匀,轻轻颠倒离心管几次使管内混合物成乳浊液,常温下10000rpm离心10min,取上清液转入另一干净的离心管中。3、重复步骤2一次。4、取上一步骤中上清液加入2.5倍体积无水乙醇,仔细混匀,-20℃冰箱30min以上,沉淀DNA 4℃,12000rpm离心10min。5、弃去上层有机溶剂,加500μL 75%乙醇洗涤沉淀,4℃下8000rpm离心5min,弃去上清,洗涤沉淀3次。6、倒置或者37℃培养箱烘干。7、加50μL TE缓冲液溶解DNA,于-20℃冷藏备用。

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