1.3实验仪器
电子天平、液氮、陶瓷研钵、移液管、移液枪、台式高速离心机、恒温水浴锅、2mL无菌离心管、无菌牙签、吸水纸、紫外-可见分光光度计、比色皿、微波炉、250mL锥形瓶、制胶板、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像分析系统。
1.4材料处理
本课题以甘蓝型油菜为实验材料，取其新鲜幼叶和幼茎，均分别采取CTAB法和SDS法提取DNA。提取出的油菜幼叶DNA分别编号为CTAB-1，SDS-1；提取出的油菜幼茎DNA分别编号为CTAB-2，SDS-2。
1.4.1CTAB法(十辣烷基三甲基溴化铵法)
(1)将油菜用70%的乙醇在其表面消毒，用蒸馏水冲洗3次。晾干后，取1.5g油菜幼嫩叶片(或茎)置于研钵中，用液氮研磨成细粉末，迅速转移至2mL离心管中。
(2)将CTAB提取液置于65℃热水浴中预热10min，然后用移液枪分别吸取800μL预热过的CTAB提取液和20μL 10%β-巯基乙醇加入至离心管中，充分混匀后置于65℃热水浴中30min，在此期间需颠倒混匀几次，取出后冷却至室温。
(3)用移液枪吸取400μL的Tris饱和酚加入离心管中，充分混匀，置于65℃恒温热水浴中20min，取出后置于在离心机中以10000r/min的转速离心10min，离心结束取出，用移液枪吸取上清液至另一洁净的2.0mL离心管中。
(4)用移液枪吸取与上清液等体积的Tris饱和酚至离心管中，充分摇匀，置于离心机中以10000r/min的转速离心10min，离心结束取出，用移液枪吸取上清液至另一洁净的2.0mL离心管中。
(5)用移液枪吸取与上清液等体积的酚/氯仿/异戊醇(V:V:V=25:24:1)加入至离心管中，充分摇匀，置于离心机中以10000r/min的转速离心5min，离心结束
后取出，用移液枪吸取上清液至另一洁净的2.0mL离心管中。
(6)用移液枪吸取与上清液等体积的异丙醇，于常温下静置10min后，置于离心机中以12000r/min的转速离心10min，轻轻倒掉上清液而保留沉淀。
(7)用移液管吸取1mL 70%乙醇至离心管中洗涤沉淀3min，轻轻倒掉乙醇后，置于离心机中以12000r/min的转速,4℃下离心1min，离心结束取出，轻轻弃去离心管中残留液体，并静置于室温下晾干5min。
(8)用移液枪吸取50μL含10μg/mL RNase A的TE缓冲液至离心管中，置于37℃温水浴中30min充分溶解沉淀，达到除去RNA杂质，纯化DNA的目的。
(9)加入100μL TE缓冲液溶解DNA样品，置于冰箱中﹣20℃保存备用。
1.4.2SDS法(十二烷基硫酸钠法)
(1)将油菜用70%的乙醇在其表面消毒，用蒸馏水冲洗3次。晾干后，取1.5g油菜幼嫩叶片(或茎)置于研钵中，用液氮研磨成细粉末(越细越好)。
(2)用移液管吸取1mL的DNA提取缓冲液至研钵中，与已研磨好的粉末混匀，转移至2.0mL离心管中。
(3)用移液管吸取0.5mL的DNA提取缓冲液洗涤研钵，把洗涤液转移至2.0mL离心管中，然后将离心管置于离心机中以8000r/min的转速离心10min，离心结束取出，轻轻倒掉上清液而保留沉淀。
(4)用移液管吸取1mL的DNA提取缓冲液至含有沉淀的离心管中，充分混匀后，置于离心机中以8000r/min的转速离心10min，轻轻倒掉上清液而保留沉淀。
(5)重复步骤(4)2遍直至上清液颜色变浅。
(6)将DNA裂解液置于65℃热水浴中预热10min，然后用移液枪吸取500μL预热过的DNA裂解液至离心管中，使用牙签轻轻将沉淀和裂解液搅拌均匀，置于65℃热水浴中保温30min，在此期间需轻轻颠倒混匀几次。
(7)从水浴锅中取出离心管，用移液枪吸取500μL氯仿/异戊醇迅速加入离心管中，反复颠倒几次混匀呈现乳白色，然后将离心管置于离心机中以10000r/min的转速离心5min，离心结束取出，用移液枪吸取上清液至另一洁净的2.0mL离心管中。
(8)用移液枪分别吸取55μL冰预冷的5mol/L KAc溶液和125μL无水乙醇，颠倒混匀，置于离心机中以10000r/min的转速离心10min，离心结束取出，用移液本文来自辣-文^论~文/网，
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枪吸取上清液至另一洁净的2.0mL离心管中。
(9)用移液枪吸取300μL异丙醇至离心管中，在室温下静置30min，然后将离心管置于离心机中以12000r/min的转速离心10min，轻轻倒掉上清液而保留沉淀。
(10)用移液枪吸取500μL 70%乙醇至离心管中，在室温下静置3min，然后将离心管置于离心机中以12000r/min的转速离心5min，轻轻倒掉上清液，打开盖子，在室温下晾干5min。
(11)用移液枪吸取30μL含10μg/mL RNase A的TE缓冲液至离心管中，37℃温水浴1h后取出，置于离心机中以12000r/min的转速离心30s。
(12)加入100μL TE缓冲液溶解DNA样品，置于冰箱中﹣20℃保存备用。
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