讨论
大量研究发现，当植物在正常的生长发育过程中受到生物或非生物因素侵害胁迫时会产生由水杨酸、脱落酸、乙烯及茉莉酸等内源激素所调控的免疫应答反应[19]，茉莉素即为一类新发现的植物激素，在调节植物体对属节肢门食草动物的取食侵害、病原微生物侵害及紫外线和臭氧的损伤等因素的胁迫反应中发挥核心作用[20-22]，同时它还在植物体多样性的发育过程中起重要调控作用[23-25]。研究表明，茉莉酸类物质总体上发挥保证植物免疫防御与生长发育相关代谢的平衡的作用，使植物对不同的环境产生良好的适应性[26-28]。
COI1基因为茉莉素信号传导链中关键基因[29]，部分与植物发育有关，部分与植物自身防御系统有关[30]。通过对拟南芥[10]、烟草[31]、大豆[32]、辣椒[33]等多种植物COI1的克隆及氨基酸序列分析发现，COI1所编码蛋结构域中，F-box蛋白可与SKP1和Cdc53(cullin)形成SCF泛素连接酶复合体，与JA应答反应的抑制因子选择性结合，介导该抑制因子与泛素结合，从而参与泛素蛋白降解反应使蛋白质根据生理需要选择性被降解，进一步对细胞循环、信号传导、基因转录和细胞程序死亡等重要过程发挥调控作用[34-35]。
病毒诱导的基因沉默(Virus-induced gene silencing, VIGS)是指携带目标基因片段的病毒侵染植物后，可诱导植物内源基因沉默、引起表型变化，进而根据表型变异研究目标基因的功能，属于转录后基因沉默(Post-transcript gene silencing, PTGS)。
VIGS为一种天然存在于植物体中对外源核酸入侵的具有抵御作用的机制，可被病毒RNA激活，使植物体免受病毒的侵染伤害。双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)作为基因沉默的关键起始因子[36]，可在体内被Dicer酶(与RNAseIII类似)降解成小分子干扰性RNA(small interference RNA, siRNA)，进而与RNAse结合形成RNA诱导的沉默复合体(RNA induced silencing complex，RISC)，RISC可对与其同源的mRNA发生特异性攻击，从而抑制其进一步的表达[37]。若使带有目的基因片段的病毒载体侵染寄主植株，会导致植株出现目标基因功能丧失或表达水平下降的表型，利用此机制确定该基因的主要功能，具有简单、快速，且可以高通量的分析已知序列基因功能的显著优点[38]。
早期对茉莉素的研究主要是通过外源施加JA或MeJA来研究其生理功能，近年来随着分子生物学技术的兴起与成熟，多数研究已经深入到有关其生物合成和代谢的分子调控机理方面，并取得显著成果。本研究即采用了分子生物学研究中广泛应用的基因克隆技术和载体构建技术来探究番茄中茉莉酸信号转导途径的关键基因。
本实验中，以番茄MM为材料，本文来自辣*文#论-文%网，
毕业论文 www.751com.cn 加7位QQ324~9114找原文采用经典的RT-PCR技术于番茄cDNA中克隆LeCOI1，得到361bp大小的序列，经NCBI网站BLAST比对分析后发现与数据库中多数已上传的植物的COI1基因具有较高源性，可以推断LeCOI1是COI1在番茄MM中的同源基因，是番茄茉莉酸信号转导途径中的关键调控因子。同时采用分子生物学中广泛应用的重组载体构建技术，以pYY13质粒为载体成功构建了携带茉莉酸信号转导途径的关键基因LeCOI1的VIGS载体，为研究沉默LeCOI1基因的番茄植物生长发育的影响和免疫防御反应的实验做准备。
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番茄LeCOI1基因的克隆与沉默载体的构建 第5页下载如图片无法显示或论文不完整，请联系qq752018766
