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产醇脱氢酶埃切毕赤酵母的发酵优化及其催化 第3页

更新时间:2016-10-23:  来源:毕业论文
1.3生物催化羰基还原反应原理
含有芳香基的手性醇是许多手性药物合成的关键手性砌块,不对称还原前手性酮是合成该类手性醇的重要方法。当前对这类前手性羰基化合物的不对称催化还原主要有化学法和生物法。化学法采用的催化体系主要有手性氨基醇类与化学还原剂的混合物以及过渡金属配合物等。化学法可以获得较高的产率,但主要缺点是反应的立体选择性偏低,且手性催化剂的制备比较困难。而生物催化因其高度的立体专一性,在催化该类不对称还原反应中具有很好的应用前景。生物催化羰基的不对称还原主要是醇脱氢酶和其他氧化还原酶作用下进行的,同时还需辅酶NADH或NADPH参与。反应由还原型辅酶NAD(P)H提供的氢,在氧化还原酶的作用下从R或S面进攻羰基生成相应的单一对映体醇。同时辅酶被转化成氧化型NAD(P)+。为了使反应一直进行下去,需要不断地补充还原型辅酶NAD(P)H。但该类辅酶非常昂贵,不可能在反应过程中加入化学计量需要的辅酶。通过使用活性细胞反应可以解决这一问题[13,14,15]。

1.4 生物催化法合成手性醇类化合物
对生物催化羰基的不对称还原已有许多研究和报道,一般以微生物或植物细胞作为生物催化剂。
微生物细胞中含有可以接受广泛非天然产物的多种脱氢酶,所有必需的辅酶和再生途径,这样辅酶循环由细胞自动完成,进行还原反应时,只需加入少量廉价的碳源化合物(如葡萄糖或蔗糖)作为辅助底物即可,同时所有酶和辅酶被保护在其天然的细胞环境中。面包酵母(baker’s yeast,学名Saccharomyces cerevisiae)在羰基不对称还原反应中的应用已有许多报道,它是一种被广泛利用的廉价微生物,其细胞内存在着丰富的氧化还原酶,可催化各种羰基化合物的不对称还原反应,并对该类反应具有高度的立体选择性,它可以还原的酮类包括:⑴单酮的还原:其中包括环状酮、双环或多环酮、非环状酮的还原;⑵双酮的还原:其中包括环状双酮和非环状双酮的还原;⑶ α-酮酯的还原;⑷α,γ-双酮酯和酮α,γ-双酯的还原;⑸β-酮酯的还原;⑹γ-或β-酮酸或酮酯的还原[6]。羊明等[7]从近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCC 203011)中分离得到了新的NADPH依赖型羰基还原酶,该酶蛋白是不对称合成手性醇有效的生物催化剂之一。固载化的细胞用于催化还原反应也成为最近研究的热点。海藻酸钙包埋的面包酵母菌[16]在柠檬酸缓冲液(pH 4.0)中能催化乙酰乙酸乙酯,本文来自辣%文,论'文.网,毕业论文 www.751com.cn 加7位QQ324~9114找原文 还原为非对映体R-,S-二醇,两者比率为10:1。
植物是人类赖以生存的食物和药品的重要来源之一。人们已知的三万多种天然产物中有80%来源于高等植物,而且在植物细胞的液泡、溶酶体等中富含各种各样的促进植物生长发育的酶,因此利用植物细胞进行生物转化羰基化合物的反应具有重大的研究意义[17]。1997年,H. Hanmda等[10]利用长春花悬浮细胞培养对香芹酮进行生物催化,发现它的烯丙基被羟基化,双键和酮被还原。Nashima[18,19]报道用胡萝卜的固载化细胞能将羰基化合物还原为相应的(S)-仲醇,对映体过量(ee)为32%-99%。G. Kumaraswamy等[12]发现浸泡过后的绿豆亦可以作为生物催化剂还原芳香酮类化合物且反应效率较高,该方法已被成功地应用于克数量级规模生产旋光性的醇,而且该方法最适合生产重要的药物分子。这种利用植物细胞生物还原羰基的方法实验操作较简单,所需要的生物技术含量较低。[20,21]

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