2.1.3实验试剂
表2.2. 实验试剂
材料 厂家 备注
甘油 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
山梨酸钾 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
茶多酚 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
苯甲酸钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
植酸钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
BHA 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
L-抗坏血酸钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
异抗坏血酸钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
磷酸氢二钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
磷酸二氢钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
邻苯二酚 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
氯化钠 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
营养琼脂 国药集团化学试剂有限公司 分析纯
2.2 实验方法
2.2.1所用溶液的配制
（1）pH6.8磷酸缓冲液：磷酸氢二钠(12H2O) 0.2mol/L 3.1164g和磷酸二氢钠(2H2O)0.2mol/L 2.7948g加200ml蒸馏水溶解于1000mL容量瓶。
（2） 0.1mol/L邻苯二酚：又名儿茶酚(C6H6O2)，称取1.124g邻苯二酚，DW定容至100mL容量瓶，避光保存。
（3） 1g/L植酸钠，BHA,L-抗坏血酸钠、异抗坏血酸钠:分别称0.1g植酸钠，BHA,L-抗坏血酸钠、异抗坏血酸钠定容至100mL容量瓶。
（4）0.8g/L，0.6g/L，0.4g/L，0.2g/L L-抗坏血酸钠：依次称0.08g，0.06g，0.04g，0.02gL-抗坏血酸钠定容至100mL容量瓶。
2.2.2抗氧化剂作用效果的测定方法
（1）苹果多酚氧化酶粗酶液的提取：苹果洗净后，去皮，称100g苹果果肉于粉碎机中，在低温条件下快速榨汁，2层纱布过滤，然后5000 r/min离心20min，上清液即为粗酶液[13]，保存于烧杯中，加上保鲜膜。
（2）PPO活性测定方法[14]: 吸取磷酸缓冲液(pH6.8)2ml，加入8ml0.1mol/L的邻苯二酚，先于30℃保温5min，再加2ml的酶液，迅混匀后进行测定并纪录A410的变化(每隔30s)记录1次吸光值，共记录5min，重复测三次。一个活力单位(U)定义为测定条件下每1min引起吸光值改变0.01所需的酶量。每测定重复三次，分别平行取样，结果以平均值计算。
（3）褐变度的测定: 采用消光值法。称取样品100g于粉碎机中，加入100mL蒸馏水，在低温下匀浆40s后，离心20min(5000 r/min)，取上清液,平均分配至五个烧杯中，依次加入不同浓度的同种抗氧化剂在420nm波长下测定其吸光度，结果以D420 nm 表示褐变度[15] 。
2.2.3抑菌剂作用效果的测定方法
（1）生理盐水的配制：称0.45g氯化钠于锥形瓶中，加入50mL蒸馏水，搅拌至充分溶解。
（2）0.3%山梨酸钾，苯甲酸钠，茶多酚的配制：称0.3g山梨酸钾，苯甲酸钠，茶多酚于100mL容量瓶定容。
（3）培养基的配制：称15.2g营养琼脂于烧杯中，加入400mL蒸馏水，搅拌后加热至沸腾，平分至四个锥形瓶，每个100mL，其中三个锥形瓶依次加入0.5mL0.3%的山梨酸钾，苯甲酸钠，茶多酚。
（4）0.1%，0.2%，0.4%，0.5%山梨酸钾的配制：依次称0.1g,0.2g,0.4g,0.5g山梨酸钾定容至100mL容量瓶。
（5）培养基的配制：称15.2g营养琼脂于烧杯中，加入400mL蒸馏水，搅拌后加热至沸腾，平分至辣个锥形瓶，前五个锥形瓶每个倒入60mL，最后一个倒100mL。依次加入0.3mL的0.1%，0.2%，0.3%，0.4%，0.5%山梨酸钾。
（5）样品菌落总数的测定：切取一块苹果皮浸泡于无菌生理盐水中，10min后捞出，用玻璃棒搅拌无菌生理盐水至均匀稀释液。用移液枪移0.2mL于事先倒有营养琼脂的灭菌平皿中，每个稀释度做三个平行，稀释液用灭菌玻璃棒均匀涂布，同时做空白对照。将平皿倒置于36℃恒温培养箱内48±2h。取出后计算平板内菌落数目。
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