引言
当今世界,由于大量新的化合物合成,各种各样生活污水和工业废物的随意排放,使得环境污染日益严重[1-3]。有关化学诱变剂对水稻、小麦的生理特性及生物学效应等方面的影响报道[4-6]较多,而关于化学诱变剂对玉米种子萌发和生长的影响研究很少。欲了解化学诱变剂对机体的直接及潜在的危害,需要利用真核类的测试系统来推测诱变物质对人类或者其他一些高等生物的遗传危害[7]。本研究以玉米为实验材料,以生活污水主要成分洗衣粉和洗洁精及工业污水主要成分之一的重金属镉为化学诱变剂,研究其对玉米种子萌发、幼苗生长、根尖细胞分裂和染色体的影响,并对化学诱变剂影响玉米种子萌发的机制进行初步探讨,旨在为检测化学物对环境的危害以及对人体和其他高等生物的健康风险提供科学依据。
1. 材料与方法
1.1 材料本文来自辣\文/论~文?网,
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1.1.1 玉米种子
郑单958。
1.1.2 药品与试剂
洗衣粉、洗洁精、重金属镉、次氯酸钠、固定液、醋酸洋红等。
1.2 仪器
烧杯、培养箱、培养皿、尺子、剪刀、载玻片、盖玻片、吸水纸、显微镜、培养箱等。
1.3 方法
1.3.1 各种化学诱变剂的配制
用电子天平分别称取一定量的洗衣粉粉剂溶于水中,配成洗衣粉溶液的浓度分别为 0.1g/L、0.5g/L、2g/L;同法配成浓度分别为0.1g/L、0.5g/L、2g/L的洗洁精溶液和浓度分别为5mg/L、25mg/L、100mg/L的重金属镉溶液。
1.3.2 种子处理
将玉米种子用清水冲洗后,放入5%的次氯酸钠中消毒1h,消毒结束后用清水浸种24h[8-9]。将浸泡过的玉米种子分为处理组与对照组,处理组分别用0.1g/L、0.5g/L、2g/L的洗衣粉溶液、0.1g/L、0.5g/L、2g/L的洗洁精溶液和5mg/L、25mg/L、100mg/L的重金属镉溶液浸种处理24h(置于25℃的培养箱中),对照组用清水浸种处理24h[10-11]。处理组玉米种子处理结束之后,用清水反复冲洗1h。将处理好的玉米种子整齐排列在铺有4层湿润滤纸的培养皿中,每皿25粒,并做好标记[12-13]。
1.3.3 各种指标测定
对处理组与对照组玉米种子萌发及生长过程中各种指标进行测定,主要测定指标包括发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、芽长、根长、根系活力、根尖有丝分裂指数和微核率等[14-16]。各种指标测定方法如下:
发芽后第4d测定发芽势,第8d统计发芽率;玉米种子的发芽以胚芽的长度达到与种子的长度相等,而胚根的长度约为种子长度的一半时为标准。第8d计算发芽率的同时测量玉米的芽长和根长,均以10 株的平均值表示。根长至1.5cm左右时,取根尖制成临时装片,统计有丝分裂指数和微核率。
发芽势=发芽高峰期发芽的种子数/供试种子数×100%
发芽率=发芽的种子数/供试种子数;
发芽指数= ∑Gt/ Dt =当天的发芽数/发芽日数+当天的发芽数/发芽日数+……;
活力指数 = 发芽指数 × 芽长;
根系活力测定[17]:采用TTC法测定根系活力;
有丝分裂指数测定[18]:用处于有丝分裂M期细胞数占其总细胞数百分数表示;
微核率测定[19]:每一处理观察3个根尖,每个根尖数100个细胞,统计其中含有微核的细胞数,求出平均值,即微核百分率。
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