Isolation and Purification of MnP in Trametes gallica Fr.
Student majoring in Bioscience Chen Yanling
Tutor Sun Xun
Abstract：The crude enzyme from wheat straw solid culture of Trametes gallica Fr. was ultra-filtrated, salted-out, dialyzed and applied to Sepharose-Q Fast Flow ion exchange column. A component with manganese peroxidase activity was obtained.
Key words: Trametes gallica Fr.,Manganese Peroxidase, ion exchange chromatography.
引言
为了研究白腐菌锰过氧化物酶降解底物的机理，必须首先对原酶液中的锰过氧化物酶进行分离与纯化。在分子生物学和生物化学研究工作中，生物大分子的分离和纯化一直是一项非常重要的工作，因为要研究生物大分子的结构和功能，首先就要得到纯的样品。分离纯化是进行酶学性质研究、分子研究的前提条件，是成功确定氨基酸序列和三文结构的基础。酶的常规分离技术有离子交换、凝胶过滤、疏水层析和亲和层析等。本研究对粗毛栓菌在液体培养过程中所产生的锰过氧化物酶进行分离和纯化，其目的是就是为了对MnP的性质进行研究和分析，并通过此研究找出锰过氧化物酶的特殊作用以应用于大规模生产。
粗毛栓菌（Trametes gallica Fr.）是一种降解木质纤文素能力强、产木质纤文素降解酶酶系齐全的白腐担子真菌，在我国广泛分布，主要生长于杨木上，是杨木的一种主要降解者。它可产生木质素过氧化物酶、锰过氧化物酶、木聚糖酶、漆酶。锰过氧化原文请找腾讯752018766辣,文:论'文.网http://www.751com.cn 物酶（MnP）的底物专一性弱，可氧化各类芳香化合物，所以具有极高的工业应用潜力，如生物制浆、纸浆的酶法漂白、有机污染物的降解和环境的生物修复等。在环境保护中，工业“三废”、化学农药分解时往往产生毒性物质，MnP能将其逐步降解为二氧化碳。在造纸工业中，MnP在纸浆的生物漂白方面有很大的应用前景。在褐煤的生物降解中，微生物对低阶煤具有脱硫、液化等能力，可减少能源的浪费和环境的污染，成为研究的热点，所以研究MnP具有很重要的价值［1］。
1 材料与方法
1.1 主要仪器及试剂
HZQ-Q全温振荡器（中国哈尔滨东联电子技术开发有限公司）；电泳仪DYY-8C型（北京市辣一仪器厂）；生化培养箱HPS-250；梯度混合器TH-500（上海沪西分析仪器厂）；恒流泵HL-2（上海沪西分析仪器厂）；核酸蛋白检测仪HD-1（上海沪西分析仪器厂）；自动部分收集器BJQ-74-2（上海医用分析仪器厂）；阴离子交换剂Q-Sepharose Fast Flow购自Pharmacia公司；紫外分光光度计TU-1810（北京普析通用仪器有限公司）；立式自动电热压力蒸汽灭菌锅LDZX-40AI(上海申安医疗器械厂)；试剂除甘氨酸、TEMED（冰箱中至多保存7天）均购自Sigma公司，marker购自日本TaKaRa公司外，其余试剂均为国产分析纯或化学纯试剂。