粗毛栓菌木聚糖酶cDNA的RT-PCR扩增
一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)
木聚糖酶广泛应用于造纸、食品、饲料添加等方面,已受到广泛的关注。近年来, 木聚糖酶成为制浆造纸工业应用木聚糖酶最多的行业, 这方面每年都有大量的文献报道。迄今为止, 木聚糖酶在食品行业中的应用虽已渐渐深入, 但其发展空间仍相当广阔。有望在生产实践中应用的木聚糖酶具备优良性质,如高比活性的酶可降低应用成本,抗逆性强的酶具有更好的贮存和应用稳定性等。因此有必要利用现代基因工程技术,有目的地选育、改良木聚糖酶,以满足实际生产的需要,从而发挥其应用潜力。
PCR技术即聚合酶链反应，是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点。在分子生物学基础研究上，PCR被广泛地用于基因克隆和制造突变。RT-PCR技术现已成为国内外研究的热点，在基础研究方面不仅可以扩增目的基因，还可对基因组测序，用反向PCR方法填补拼接时留下的“缺口”（gap）。RT-PCR技术不仅可用于RNA分析，还可用于检测活动性的隐性病毒感染等。本课题主要是在对粗毛栓菌木聚糖酶的分布、来源、结构、性质及其功能等各方面有了深入了解的基础上，通过RT-PCR技术，对木聚糖酶的cDNA进行扩增。
二、研究的主要内容及预期目标
主要内容：培养粗毛栓菌，提取RNA， RT-PCR反应。
预期目标：通过PCR反应获得木聚糖酶的cDNA
三、研究方案（思路）
以半纤文素作碳源，用浅层静置培养基培养粗毛栓菌,培养9-12天后收集菌丝体，提取总RNA，然后进行RT-PCR反应。
四、论文进度安排
2010.3.10--2010.4.06 查阅文献资料，确定研究方法，技术路线和实验方案。
2010.4.06—2010.5.10 实验准备阶段，即材料采集及实验仪器的处理。
2010.5.10--2010.5.24 实验实施阶段，包括菌株的培养，RNA的提取，RT-PCR。
2010.5.24—2010.5.27 进行数据处理和实验现象分析，并撰写实验论文。
2010.5.27—2010.6.02 修改论文，准备答辩。
五、主要参考文献：原文请找腾讯752018766辣,文^论'文.网http://www.751com.cn
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辣、指导教师意见
该生毕业设计思路清晰，目的明确，实验安排妥当，步骤有条理性，希望其严格按照实验步骤进行相关工作，取得满意结果。1801