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粗毛栓菌木聚糖酶cDNA的RT-PCR扩增+开题报告 第5页

更新时间:2011-4-27:  来源:毕业论文
粗毛栓菌木聚糖酶cDNA的RT-PCR扩增+开题报告 第5页
 总RNA纯度与浓度的检测
在756分光光度计中,260nm波长下,1 OD值的光密度相当于单链RNA浓度的40g/mL,所以RNA样品浓度计算公式为:总RNA样品的浓度(g/L)=OD260 ×核酸稀释的倍数×40÷1000 。菌丝体总RNA制备物的OD260 为0.046,所以总RNA浓度为:OD260 ×核酸稀释的倍数×40÷1000=0.046 ×(2500/25)×40/1000 = 0.184g/L。测得OD260、OD280值分别为0.046和0.032, 所以OD260 /OD280的比值为1.44。
3.3  木聚糖酶cDNA的PCR扩增及检测
木聚糖酶cDNA的PT-PCR效果比较明显,两条带大约为1000bp和1200bp。
            图2 粗毛栓菌木聚糖酶cDNA的PCR扩增
                        第1道 DNA Marker;第2道 49℃;第3道 53℃
4  讨论
4.1总RNA电泳结果
(1)OD260 /OD280比值低的原因可能是:
     总RNA的抽提过程中蛋白质及苯酚没有去除干净。
(2)没有看到明显的条带的原因可能是:
在操作过程中带入了RNA酶将提取的总RNA被部分分解了;也有可能是所提取的RNA量太少。
4.2 PCR扩增结果
     扩增出两条带,原因可能是:F与R1,F与R2分别扩增出一条带;F与R1或R2其中的一条扩增出,带亮度强弱不同是因为R在mRNA模板上有两个结合位点,一个位点较疏松,所以较暗。

5  结束语
近年来,由于半纤文素酶在生产上的应用越来越广泛,对它们的研究也越来越深入,这当中以木聚糖酶的研究开展得较多。起初的工作侧重于分离木聚糖酶产量高的菌株以及对木聚糖酶的分离纯化,后来,随着实验手段的改进和分子生物学的发展,运用基因工程的相关技术,开展了对木聚糖酶基因的研究工作,同时也进一步推动了该酶在生产上的应用。本实验的后续工作,验证所获cDNA的特异性,做RACE克隆全长cDNA做表达研究等。

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致谢
这次毕业论文能够得以完成,是所有曾经指导过我的老师,帮助过我的同学,一直支持着我的家人对我的教诲、帮助和鼓励的结果。我要在这里对他们表示深深的谢意!
    首先,要特别感谢我的指导老师—孙迅博士。孙老师在我毕业论文的撰写过程中提供了极大的帮助和指导。从开始选题到中期修正,再到最终定稿,孙老师给我提供了许多宝贵建议。老师渊博的专业知识,严谨的治学态度,精益求精的工作作风,诲人不倦的高尚师德,朴实无华、平易近人的人格魅力对我影响深远。不仅使我树立了远大的学术目标、掌握了基本的研究方法,还使我明白了许多待人接物与为人处世的道理。
    其次,要感谢我的同学燕涛、伍豪在实验流程设计和具体仪器操作方面给了我莫大的帮助。在整个实验过程中他们帮助我了解熟悉各种先端高科技仪器的正确使用规则。
第三,感谢我的父母亲,你们是我力量的源泉,只要有你们,不管面对什么样的困难,我都不会害怕,谢谢你们对我的支持与鼓励!
最后真心的感谢我的老师和所有帮助过我的同学!

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