粗毛栓菌木聚糖酶的初步分离与纯化
生物工程专业学生 刘于蓝
指导老师 孙迅
摘要 将粗毛栓菌在麦草粉培养基中培养所得培养物浸提得粗酶液，经超滤浓缩、盐析、透析和Sephadex G-150分子筛层析和活性-聚丙烯酰胺凝胶电泳获得具有木聚糖酶活性的组分。
关键词 粗毛栓菌，木聚糖酶，分子筛层析，活性电泳
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of xylanase in Trametes gallica Fr.
Student majoring in Biological Enginering Liu Yulan
Tutor Sun Xun
Abstract The crude enzyme from wheat-straw culture of Trametes gallica Fr． was ultrafiltrated, salted-out ,dialyzed and applied to Sephadex G-150 molecular sieving column．A component with xylanase activity was eventully obtained by native polyacrylamide gel electrophoresis．
Key words Trametes gallica，xylanase，Sephadex G-150 molecular sieving，native-PAGE
引言
木聚糖的完全降解需要木聚糖水解酶系中各种酶之间协同完成，木聚糖酶系包括内切β-木聚糖酶，外切β-木聚糖酶和β-木二糖苷酶，内切木聚糖酶( endo-1，4-β-D-xylan xylanohydrolase; EC3.2.1.8) 简称木聚糖酶，能够水解木聚糖分子β-1 ，4 糖苷键，把木聚糖降解成为低聚木糖，具有重要的应用价值[1]。木聚糖酶在造纸、果汁澄清、麻棉等植物纤文脱胶和饲料加工等方面都具有潜在的应用价值，尤其在造纸业中的应用可以减少环境污染[2]。为研究木聚糖酶降解底物的机理，必须对木聚糖酶进行分离与纯化，酶的常规分离方法有离子交换、凝胶过滤、疏水层析和亲和层析等[3]。目前，膜处理技术、免疫纯化技术、双水相体系、界面亲和层析等现代分析分离方法的发展，把生物大分子物质的分离和纯化工作提高到一个新的阶段[4]。木聚糖酶广泛存在于真核和原核生物以及某些动植物中。粗毛栓菌Trametes gallica Fr.是一种白腐担子菌，研究表明该菌具有较强的降解木质纤文素的能力[5]。本文主要对粗毛栓菌在麦草固体培养过程中产生的木聚糖酶进行分离与纯化，目的是为研究该酶的性质提供纯酶。
1材料与方法
1.1主要仪器及试剂
1.1.1仪器
主要仪器：LDZX-40AI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；飞鸽牌系列高速冷冻离心机 ；Hisense冰箱（海信北京电器有限公司）；TH-500梯度混合器（上海沪西分析仪器厂）；HL-2恒流泵（上海泸西分析仪器厂）；XWT-S小型台式记录仪(上海自动化仪表三厂)；HD-核酸蛋白检测仪（上海泸西分析仪器厂）；BJQ-74-2自动部分收集器（上海医用分析仪器厂）；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。
1.1.2 主要试剂
Sephadex G-150购自Pharmacia公司；桦木木聚糖（birchwood xylan）购自美国Sigma公司， 其它试剂均为国产分析纯。