Isolation and Purification of xylanase in Trametes gallica Fr.
Student majoring in Biology Science Lu Hui
Tutor Sun Xun
Abstract The crude enzyme from wheat-straw culture of Trametes gallica Fr． was ultrafiltrated, salted-out ,dialyzed and then a component with xylanase activity was eventully obtained .
Key words Trametes gallica Fr.，xylanase，salt precipitation，dialysis.
引言
植物半纤文素是异质多糖,是陆生植物的一种主要组分，约占其干重的15%-30%，木聚糖是植物半纤文素的主要成份，是除纤文素之外自然界中最为丰富的多糖，约占植物总糖的三分之一,也是自然界中最为丰富的可再生资源之一[13],木聚糖的完全降解需要木聚糖水解酶系中各种酶之间协同完成,木聚糖酶系包括内切β-木聚糖酶,外切β-木聚糖酶和β-木二糖苷酶,内切木聚糖酶( endo-1,4-β-D-xylan xylanohydrolase; EC3.2.1.8) 简称木聚糖酶,能够水解木聚糖分子β-1 ,4 糖苷键,把木聚糖降解成为低聚木糖,具有重要的应用价值[1],木聚糖酶可以应用在能源工业中[14],用应在酒精工业中能够提高淀粉利用率[2,15]；可以作为食品、饮料工业用酶制剂；可以在纸浆造纸中用于预漂白[3,16]；还可以用在保健品生产方面[4,5],木聚糖酶的来源相当广泛，在海洋及陆地细菌、海洋藻类、真菌和反刍动物瘤胃、甲壳动物、陆地植物组织和各种无脊椎动物中都存在,本文主要对粗毛栓菌木聚糖酶的分离与纯化做初步研究并简要分析了木聚糖酶的一些性质。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1仪器
主要仪器：LDZX-40AI型立式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；飞鸽牌系列高速冷冻离心机 ；Hisense冰箱（海信北京电器有限公司）；TH-500梯度混合器（上海沪西分析仪器厂）；HL-2恒流泵（上海泸西分析仪器厂）；XWT-S小型台式记录仪(上海自动化仪表三厂)；HD-核酸蛋白检测仪（上海泸西分析仪器厂）；原文请找腾讯752018766辣,文-论'文.网http://www.751com.cn/ BJQ-74-2自动部分收集器（上海医用分析仪器厂）；TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。
1.1.2 主要试剂
Sephadex G-150购自Pharmacia公司；桦木木聚糖（birchwood xylan）购自美国Sigma公司，DNS 即3，5-二硝基水杨酸(上海亚太医药工业研究所生产试剂)；其它国产分析纯或化学纯试剂。
1.1,3溶液的配制
1.1.3.1 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
甲液：称取10g NaOH，用去离子水溶解，定容至200mL，将其分为50mL和150mL两部分，在50mL NaOH溶液中加入2g苯酚，在150mL NaOH溶液中加入10g DNS，加热溶解。乙液：称取300g酒石酸钾钠溶于500mL水中，加热溶解。待甲乙两种溶液冷却后，将二者合并、混匀，加入0.5g亚硫酸氢钠，搅拌、混匀，定容至1000mL。