1.1.4菌株
本实验室保存的现成的具有较强降解木质纤文素能力的菌株—粗毛栓菌（Trametes gallica Fr.），白腐担子菌粗毛栓菌系菏泽学院的孙迅博士于1997年8月在山东省菏泽市北郊的护城堤上，从被砍伐的杨树上分离得到的。该野生菌株于同年经由山东省科学院生物研究所微生物分类室的马启明先生对其进行了初步鉴定，定名为Trametes gallica Fr.[6]。
1.2 试验方法
1.2.1 木糖标准曲线的制作
准确称取干燥至恒重的木糖标准品50mg，用蒸馏水溶解，定容至50mL。
按下表在各管中加入各种试剂：
空白 1 2 3 4 5
含糖总量（mg） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
木糖溶液（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
DNS试剂（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
将上述试剂加完后，混匀各管，沸水浴5min，冷却至室温，分别用去离子水将各管定容至25mL，混匀。选用光程1cm的比色杯在550nm处比色，用空白管作对照，测各管光密度值，每管重复三次，求平均值。以木糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线[48]。
1.2.2硫酸铵盐析
向经超滤浓缩的粗酶液中添加固体(NH4)2SO4至30%饱和度，4℃过夜，离心（60,00r/min，4℃）15min，除去杂蛋白沉淀物，取上清；然后将硫酸铵饱和度上调至75%，再于4℃静置过夜，离心（75,00r/min，4℃）10min，弃上清，将沉淀于-4℃冰箱中保存，备用。
1.2.3木聚糖酶[β-(1→4)D–Xylanase]活力测定
采用DNS（dinitrosalicylic acid）法即3,5–二硝基水杨酸法[50,51]。取0.9 mL由50mmol/L NaAc-HAc（pH5.0）缓冲液配制的1%桦木木聚糖于25mL刻度试管中，加入0.1mL适当稀释的酶液，于45℃水浴中保温30min后，加入3mL 1% DNS试剂，混匀，在沸水浴中煮15min，冷却至室温，补加水至25mL，混匀，于550nm处测定吸光值。以每分钟催化木聚糖水解生成1mol木糖所需的酶量定为1个活力单位。
木聚糖酶酶活力计算公式如下：
木聚糖酶酶活力（U min-1 mL-1）＝ nA /（150.13 × 30）
其中，n为酶液稀释倍数，A为标准曲线上吸光值所对应的木糖微克数，150.13为木糖分子量，30为酶作用时间（min）。
1.2.4蛋白含量的测定
参照Bradford[52]法：取一系列试管，分别加入0，0.2, 0.4，0.6，0.8，1.0mL的标准牛血清白蛋白溶液(100g/mL)，然后原文请找腾讯752018766辣,文-论'文.网http://www.751com.cn/ 向每试管中分别加入考马斯亮G-250（0.01%）5mL，最后用水补充至6 mL，混匀，室温静置2min，选用光程为1cm的比色杯，以不加牛血清白蛋白(BSA)的试管为对照，在595nm处比色。以牛血清白蛋白的浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。取待测样品溶液1mL，加入考马斯亮蓝G-250 5mL，混匀，按上述方法测定595nm的光密度值。平行做3份。比色后，从标准曲线上查出待测样品的蛋白质浓度。
2 结果与分析
2.1实验结果
2.1.1木糖标准曲线
在上述条件下，得木糖标准品浓度与光密度值的关系见（表2-1）
表2-1木糖浓度与光密度值的关系
木糖标准品(mg/ml) 0.2 0.4 0.6 0.8 1
光密度值（OD550） 0.101 0.280 0.464 0.622 0.747
以木糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制出标准曲线（图2.1）。计算出标准曲线方程为：A = 0.6726x－0.011（R2 =0.9987）结果表明，在0~0.8mg/mL范围内木糖浓度与光密度值线性关系良好。
图2.1木糖标准曲线图
2.1.2粗毛栓菌木聚糖酶的分离纯化结果