粗毛栓菌漆酶cDNA的PCR扩增+任务书+开题报告
设计（论文）的主要内容（技术指标）与要求：
本课题主要是在对粗毛栓菌漆酶的分布、来源、结构、性质及其功能等各方面有了深入了解的基础上，通过RT-PCR技术，对漆酶的cDNA进行扩增，大体过程如下：先提取粗毛酸菌的总RNA ，然后做RT-PCR，扩增粗毛栓菌漆酶的cDNA。
进度安排：
2010.3.10---2010.4.08 查阅文献资料，确定研究方法，技术路线和实验方案。
2010.4.20—-2010.4.27 实验准备阶段，即材料采集及实验仪器的处理。
2010.4.27---2010.5.24 实验实施阶段，包括菌株的培养， RNA的提取，RT-PCR。
2010.5.24---2010.5.30 进行数据处理和实验现象分析，并撰写实验论文。
2010.5.30—-2010.6.02 修改论文，准备答辩。
该生认真查阅参考文献，实验方案设计合理，在规定时间内完成了预定任务，初步掌握了从事有关研究的基本实验技能，具备了一定的独立从事科学研究的能力，达到了本科生的培养目标。该文达到了学士学位论文水平。原文请找腾讯752018766辣,文-论~文.网http://www.751com.cn
指导教师签名
论文表明，该同学查阅了相关文献资料，论文内容较为完整，技术运用恰当，表明该生具备了一定的独立从事科学研究的实验技能。该论文达到了学士学位论文水平，同意论文答辩。
评阅教师签名
该生能够清晰地陈述自己的主要研究目的、实验方法和结果，同时能够正确地回答相关问题，说明该生掌握了相关理论知识和实验技能。论文设计合理，内容新颖。综上所述，该论文达到了学士学位论文水平。
组长签名
综合指导教师、评阅人意见和学生答辩过程中的表现，经过认真讨论，一致同意该同学顺利通过毕业论文答辩，并建议授予学士学位。
一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)
漆酶（Laccase，Lac）是一种多酚氧化酶, 在结构和功能上与植物抗坏血酸氧化酶、哺乳动物血浆铜蓝蛋白存在着许多相似之处。它是最简单的多铜氧化酶, 一般含有 4个铜原子, 分布于 3个高度保守的不同结合位点, 每个铜原子在催化机制中都有很重要的作用。漆酶能催化 O2通过 4个电子还原成水, 并且伴随着一些酚类底物的氧化。它最早是从漆树的分泌物中发现的, 随后人们发现一些高等真菌也能分泌这种酶。现在人们知道, 漆酶广泛存在于担子菌、半知菌和子囊菌中, 但其中最主要的生产者是担子菌中的白腐菌，粗毛栓菌（Trametes gallica）是一种白腐担子菌，在我国分布广泛，是杨木的一种主要生物降解者。已有研究表明，该菌产漆酶能力较高。
漆酶早期的研究主要集中在体内功能的研究，随着20世纪70年代前后聚丙烯酰胺凝胶电泳和分子克隆等生物学技术的问世, 漆酶的研究也揭开了新的一页。在国外很多菌种的漆酶基因得到了克隆并且进行了分析和鉴定, 一些漆酶基因也实现了其异源表达。漆酶在木质素降解、微生物菌体形态形成等方面具有重要功能，普通微生物产漆酶的量及纯度不足以大规模的工业应用。要工业化生产漆酶，可通过把可高效产漆酶的基因与载体重组，然后导入受体细胞，形成稳定转化子，大批量培养，使漆酶进行异源表达。因此必须进行漆酶基因的测序，了解基因组成及酶切位点等，以便DNA重组时选择合适的限制性内切酶进行有效切割。所以漆酶的模板cDNA提取及大量扩增成为首要工作。传统的模板DNA提取方法是采用去垢剂如SDS等来破坏细胞组分，溶解细胞膜，使蛋白质变性，再用蛋白酶K来消化去除蛋白质，尤其是与DNA结合的蛋白质，再用酚-氯仿抽提，然后用乙醇沉淀核酸，供PCR实验用。本实验主要是扩增有效表达漆酶的cDNA片段，因此利用逆转录的方法制备了模板cDNA，并对其进行PCR扩增，此法去除了内含子的干扰，能满足特殊的实验要求。cDNA完整序列的获得对基因结构、蛋白质表达、基因功能的研究至关重要。
三、研究方案（思路）
菌株培养→总RNA的提取→RNA的纯度与浓度的测定→变性RNA电泳检测→RT-PCR1808