粗毛栓菌漆酶的分离纯化
摘要：将粗毛栓菌接种在含有麦草粉的培养基中培养25d,过滤得粗酶液，尔后经超滤、盐析、离心、透析、浓缩，将透析液上样于Q-Sepharose F. F.层析柱，获得具有漆酶活性的组分,并测定上柱前、后漆酶的酶活力，以及溶液中的蛋白含量，从而测定漆酶的回收率和纯化度。
关键词： 粗毛栓菌；漆酶；离子交换层析
Abstract: Trametes gallica was cultivated in wheat powder for 25 days. The crude enzyme was ultrafiltrated, salted out , centrifugaled, dialyzed and concentration was applied to Q-Sepharose F.F. ion exchage column. The effluent with laccase acticity was obtained, Determine the column before and after the laccase enzyme activity and protein content of the solution to determine the recovery rate and purification degree of laccase.
Key words: Trametes gallica； laccase； ion exchage chromatography
一、立题依据(国内外研究进展或选题背景、研究意义等)
漆酶（Laccase, EC 1.10.3.2）是一种含铜离子的多酚氧化酶，最早发现于日本紫胶漆树
Rhus vernicifera 的浸出液中，现已证实一些高等真菌(主要是白腐真菌)也能分泌漆酶。白腐真菌是生物圈中木质素、纤文素和半纤文素的重要降解者，其分泌的漆酶在木质素降解过程中起着重要作用。漆酶可与多种底物作用，在有机合成、生物检测、免疫检测、有毒化合物的消除、生物传感器制作、制浆造纸废水处理、纸浆生物漂白和饮料加工、食用菌生产、食品分子交联、植物食品保护等方面具有广阔的应用前景和潜在应用价值。多年来，已对漆酶及其产生菌进行了广泛研究，内容涉及菌株生长特性、漆酶的合成调控、酶的分离纯化和酶学性质等多个方面。现已有近百种不同来源的漆酶被分离纯化并进行了酶学性质研究，一些漆酶基因已被克隆测序，有的还在酵母等真核生物内实现异源表达，但选育新的漆酶产生菌，优化其产酶条件仍是提高漆酶产量的一条重要途径和今后一段时期内研究的热点。
本研究所用粗毛栓菌Trametes gallica 是一种能够分泌漆酶的白腐真菌，可降解麦草木质纤文素。本文就以漆酶的分离、纯化及其部分性质进行初步研究。
二、研究的主要内容及预期目标原文请找腾讯752018766辣,文-论'文.网http://www.751com.cn/
1、本文主要测定了粗毛栓菌在一种以麦草粉为诱导物的培养液中的产漆酶情况，并对酶的一些基本性质进行了研究，以便为其在生产中的应用提供理论依据。
2、对粗毛栓菌产漆酶的诱导、酶的分离纯化及其部分性质进行初步研究。
3、对粗毛栓菌漆酶进行纯化, 并对性质进行探讨, 以便为木质素的降解的研究提供一定的科学依据, 同时为在造纸工业和环保工业上的应用提供一定的理论依据。
三、研究方案（思路）
1、产酶培养基的制备及菌种培养。
2、浸提漆酶。
3、对提取的粗酶进行超滤浓缩得粗酶液。
4、对粗酶液盐析，并离心。
5、透析：除去盐离子。
6、离子交换柱层析：收集合并有酶活力的部分。
7、测定收集的酶的活力，回收率与纯化度并探讨该酶的其他一些性质。
四、论文进度安排
1、 3月27日，产酶培养基的制备。
2、 4月1日-4月26日，菌种的培养。
3、 4月28日，粗酶液的浸提。
4、 4月30日，超滤浓缩。
5、 5月3日，盐析。
6、 5月5日，离心并透析，酶活力和蛋白含量的测定。
7、 5月8日，酶液浓缩并进行离子交换柱层析。
8、 5月13日，纯化度和回收率的测定。目 录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 1
1.1 材料 1
1.1.1 菌种 1
1.1.2 高产漆酶培养基 2
1.1.3 仪器 2
1.1.4 试剂 2
1.2 方法 2
1.2.1 粗酶的制作 2
1.2.2 超滤 2
1.2.3 硫酸铵盐析 2
1.2.4 离心 2
1.2.5 透析 2
1.2.6 酶活力和蛋白含量的测定 2
1.2.6.1 酶活力的测定 2
1.2.6.2 酶蛋白含量的测定 3
1.2.7 酶液浓缩 3
1.2.8 离子交换柱层析 3
1.2.9 酶活力和蛋白含量的测定 3
1.2.10 酶回收率和纯化度的计算 3
1.2.11 漆酶的纯化与鉴定 3
2 分析和讨论 3
2.1 漆酶的诱导 3
2.2 酶液总蛋白含量 3
2.2.1 牛血清蛋白标准曲线 3
2.2.2 层析前后蛋白含量 4
2.3 离子交换层析结果 4
2.4 酶的纯化度和回收率 5
参考文献 6
致谢 6,1811