1 材料与方法
1.1 材料原文请找腾讯752018766辣,文^论'文%网http://www.751com.cn
1.1.1 仪器
仪器名称 生产厂家
Hisense冰箱 海信北京电器有限公司
TH-500梯度混合器 上海沪西分析仪器厂
HL-2恒流泵 上海沪西分析仪器厂
XWT-S小型台式记录仪 上海自动化仪表三厂
HD-核酸蛋白检测仪 上海泸西分析仪器厂
BJQ-74-2自动部分收集器 上海医用分析仪器厂
TU-1810紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司
恒温水浴锅 北京长安科学仪器厂
1.1.2 试剂
Sephadex G-150购自Pharmacia公司；桦木木聚糖（birchwood xylan）购自美国Sigma公司， 其它试剂均为国产分析纯。
1.1.3 溶液的配制
1.1.3.1 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
甲液：准确称取10g NaOH，用去离子水溶解，定容至200mL，将其分为50mL和150mL两部分，在50mL NaOH溶液中加入2g苯酚，在150mL NaOH溶液中加入10g DNS，加热溶解；乙液：称取300g酒石酸钾钠溶于500mL水中，加热溶解。待甲乙两种溶液冷却后，将二者合并、混匀，加入0.5g亚硫酸氢钠，搅拌、混匀，定容至1000mL。
1.1.3.2 0.2mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液(pH5.0)
将700mL的0.2mol/L醋酸钠溶液和300mL的0.2mol/L的醋酸溶液混合，用pH计调至pH5.0。
1.1.3.3 1%桦木木聚糖溶液
称取0.5g桦木木聚糖，加入30mL pH5.0的醋酸钠-醋酸缓冲液，加热、搅拌溶解，冷却后用同样的缓冲液定容至50mL，4℃冰箱保存。
1.1.3.4 考马斯亮试剂
称取考马斯亮蓝G-250 100mg溶于50mL95%的乙醇中，加入10mL85%的磷酸，用去离子水稀释到1000mL。
1.1.4 菌种
本实验室保存的现成的具有较强降解木质纤文素能力的菌株-粗毛栓菌（Trametes gallica Fr.），白腐担子菌粗毛栓菌系菏泽学院的孙迅博士于1997年8月在山东省菏泽市北郊的护城堤上，从被砍伐的杨树上分离得到的。该野生菌株于同年经由山东省科学院生物研究所微生物分类室的马启明先生对其进行了初步鉴定，定名为Trametes gallica[4]。
1.2试验方法
1.2.1 粗酶液的硫酸铵盐析
向粗酶液中添加固体(NH4)2SO4至30%饱和度，4℃过夜，离心（6,000r/min，4℃）15min，除去杂蛋白沉淀物；然后将上清液的硫酸铵饱和度上调至75%，再于4℃静置过夜，离心（7,500r/min，4℃）10min，弃上清，得沉淀约100mL，将沉淀于-20℃冰箱中保存，备用。将沉淀透析（截留量12-14KD），每隔3-4小时换一次4℃去离子水，直到透析袋内酶液无残留的(NH4)2SO4。透析液经聚乙二醇（平均分子量＞20,000）浓缩后，作为下一步进行分子筛层析的样品。
1.2.2 Sephadex G-150分子筛层析(1.6cmｘ115cm)
将处理好的凝胶放在大烧杯中，用去离子水反复冲洗至中性，再用50mmol/L的醋酸钠缓冲液（pH 5.0）冲洗几次。将凝胶装制成1.6×115cm柱，上样前用上述缓冲液平衡柱，过夜。上样时样品体积不宜过多，约为柱体积的1%-5%。洗脱线速度为6cm/h，每管收集2mL。检测流出液的酶活性，合并具有相同酶活性的组分，然后再如上法进行(NH4)2SO4盐析、离心和透析等步骤[7]。
1.2.3 木聚糖酶的活性聚丙烯酰胺凝胶电泳原文请找腾讯752018766辣,文^论'文%网http://www.751com.cn
活性-聚丙烯酰胺凝胶电泳（native-PAGE）[5，11]用于木聚糖酶的回收制备及活性检测，样品为经过层析法分离的部分纯化的酶样品。
8%分离胶的制备（20mL）：取5.3mL 30%凝胶储备液（含29%丙烯酰胺和1% N,N’-亚甲双丙烯酰胺）、2.5mL 3.0mol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.9）、0.1mL 10% TEMED、0.2mL 10%过硫酸铵、11.9mL dH2O，混匀，灌入DYY-Ⅲ 5型垂直板电泳槽的玻璃板间隙中，使液胶的高度为玻璃板纵长的2/3-3/4。上面封一薄水层。使玻璃板在30℃恒温箱中聚合20-30min。
5%浓缩胶的制备(10mL)：取1.7mL 30%凝胶储备液、2.5mL 0.5mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 6.7）、0.05mL 10% TEMED、0.1mL 10%过硫酸铵、5.65mL dH2O，混匀，加于分离胶上面的空隙中。在浓缩胶的上面留有1-2cm高的空隙（上样用），再如上法进行恒温聚合。进行制备电泳时，将酶液与6×加样缓冲液（含pH6.7的0.75 mol/L Tris-HCl、30%甘油、0.01%溴酚蓝）混合，上样后，利用pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲系统（25mmoL/L Tris、250mmol/L甘氨酸），于4℃进行恒流（10mA）电泳，待样品进入分离胶后，再将电流升至15mA，继续电泳。电泳至溴酚蓝指示剂离胶底面1-2cm时停止电泳