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粗毛栓菌漆酶的初步分离与纯化 第4页

更新时间:2011-5-22:  来源:毕业论文
粗毛栓菌漆酶的初步分离与纯化 第4页
漆酶酶活力计算公式   U/L=n×ΔA×106/23,300×3   (23,300为在420nm处的摩尔消光系数,ΔA代表吸光值,n代表稀释倍数,n=250) 
表1. 洗脱组分漆酶活力测定结果(λ=420;20℃)
试管号 测得的数值abs(三分钟) 试管号 测得的数值abs(三分钟)
30 0.062     U=1995.7 31 0.102    U=3283.3
32 0.121     U=3894.8 33 0.278    U=8948.5
34  0.454     U=14613.7 35  2.487    U=80053.6
36  2.080     U=66952.8 37  1.609    U=51791.8
38  0.971     U=31255.4 39  0.627    U=20182.4
40  0.496     U=15965.7 41  0.373    U=12006.4
42 0.282     U=9077.3 43 0.237    U=7628.8
44 0.184     U=5922.7 45 0.184    U=5922.7
2. 2. 2 以洗脱体积为横坐标,酶活力值做纵坐标。所得洗脱曲线见图1。
图1.粗毛栓菌漆酶的Q-Sepharose柱层析
由图可知具有较大漆酶活性的组分主要集中在139.5mL到202.5mL之间。
2. 3 蛋白质含量标准曲线
2. 3. 1 牛血清蛋白浓度与光密度值的关系,见表2。

表2.牛血清蛋白浓度与光密度值值的关系
BSA浓度(μg/ml) 20 40 60 80    100
光密度值(OD595) 0.265 0.483 0.765 0.932 1.036
2. 3. 2蛋白质含量标准曲线,见图2。
得到标准曲线的回归方程为:A=0.009955x+0.0989,结果表明,牛血清白蛋白量在0-1mg/mL范围内与光密度值线性关系良好。
图2.蛋白质含量标准曲线
2. 4 粗毛栓菌漆酶的柱层析纯化结果,见表3。

表3.粗毛栓菌漆酶的纯化结果
 Summary of the purification of laccase in Trametes gallica Fr.
纯化步骤       总酶活 /U  总蛋白/mg  比酶活(U/mg)  回收率%    纯化倍数
Purification    Total       Total      Specific      Recovery   Purification
  step         activity     protein   activity        rate        fold
粗酶液         17012.088    34.8      488.853          100          1
Crude enzyme
阴离子交换层析 1939.378     0.792     2.45×103         11.4         5.0     
Sepharose-Q fast flow

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致谢
诚挚的感谢我的指导教师孙迅教授,孙教授学识广博,治学严谨,在毕业设计的实验和论文定稿过程中,孙老师给了我细心的指导和教育,谢谢您!
感谢实验室的所有同学,在毕业设计阶段,大家的互相帮助,相互关心,相互学习,使我们有了一个很好的学习氛围和实验环境,得以顺利完成这次毕业论文的实验,谢谢大家!

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