生物科学粗毛栓菌漆酶cDNA的PCR扩增+参考文献
问1：现已经获得了两条cDNA片段，如何据此获得全长cDNA？
答：（1）对已经获得的两段cDNA进行测序，根据测序结果在现有的cDNA片段上找限制性酶切位点；
（2）选一适当的酶切位点，设计引物，所设计的5’-RACE的下游引物及3’-RACE的上游引物分别含有该酶切位点，并含有2-3个保护碱基；
（3）分别做5’-RACE和3’-RACE；
（4）分别将上述5’-RACE和3’-RACE产物用上述限制酶酶切，分别回收酶切产物；
（5）用连接酶连接，即得全长cDNA。
问2：进行RT-PCR时所用的引物一般有几个保护碱基？
答：为了将来保证限制性内切酶能够有效地结合并切割DNA，一般在PCR反应所用引物的酶切位点后加2-3个保护碱基。当引物内没有将来所用的限制性酶切位点时，一般不用加保护碱基。在本次试验中，由于没有在引物末端加入酶切位点，所以没有加保护碱基。
论文答辩评语：
该生介绍了论文的主要目的、内容与结果，能够正确回答有关提问。该生具备了一定的独立从事科学研究的能力。该论文达到了学士学位论文的水平。
该生认真查阅参考文献，实验方案设计合理，在规定时间内完成了预定任务，初步掌握了从事有关研究的基本实验技能，具备了一定的独立从事科学研究的能力，达到了本科生的培养目标。该文达到了学士学位论文水平。原文请找腾讯752018766辣:文~论;文.网http://www.751com.cn
指导教师初评成绩 指导教师签名 年 月 日
论文表明，该同学查阅了相关文献资料，论文内容较为完整，技术运用恰当，表明该生具备了一定的独立从事科学研究的实验技能。该论文达到了学士学位论文水平，同意论文答辩。
评阅教师评定成绩 评阅教师签名 年 月 日
该生能够清晰地陈述自己的主要研究目的、实验方法和结果，同时能够正确地回答相关问题，说明该生掌握了相关理论知识和实验技能。论文设计合理，内容新颖。综上所述，该论文达到了学士学位论文水平。
答辩小组评定等级 组长签名 年 月 日
综合指导教师、评阅人意见和学生答辩过程中的表现，经过认真讨论，一致同意该同学顺利通过毕业论文答辩，并建议授予学士学位。
目 录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 主要仪器与试剂用品 2
1.1.1主要仪器2
1.1.2主要试剂2
1.1.3主要用品2
1.2 菌株及培养方式2
1.2.1菌株2
1.2.2培养基3
1.3 PCR引物3
1.4 总RNA的提取与检测3
1.4.1 总RNA的提取3
1.4.2 总RNA的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳4
1.4.3 总RNA纯度与浓度的检测4
1.5 RT-PCR4
1.5.1 逆转录4
1.5.2 总 cDNA的PCR扩增4
1.5.3 PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳5
2 结果与讨论 5
2.1 总RNA电泳结果5
2.2 总RNA纯度与浓度5
2.3 PCR扩增结果6
参考文献6
致谢7,1844