摘 要 本论文以果胶为唯一碳源来培养粗毛栓菌，通过滴定法测酶活绘制了产酶曲线，结果显示在温度40℃和pH5.0时表现最大活性。
关键词 粗毛栓菌, 果胶酶,酶活，激活剂，抑制剂，最适温度，最适pH
Preliminary analysis of pectinase in Trametes gallica
Student majoring in Biotechnology Zhu Chuan-shun
Tutor Sun Xun
Abstract ：This study used pectin as sole carbon source to culture Trametes gallica .The pectinase yield-time curve was made in the paper by using titration method to measure the activity of pectinase. The result showed that the crude emzyme had an optimal 原文请找腾讯752018766辣,文-论'文;网http://www.751com.cn (40℃) and an optimal pH5.0 ,respectively.
Key words ：Trametes gallica, Pectinase,Pectinase activity,Activator,Inhibitor,Optimum temperature,
Optimum pH
引言
果胶是一类多糖的总称。 存在于植物的细胞壁和细胞内层，为内部细胞的支撑物质。柑橘、柠檬、柚子等果皮中约含30％果胶，是果胶的最丰富来源。果胶是一种天然高分子化合物，具有良好的胶凝化和乳化稳定作用，已广泛用于食品、医药、日化及纺织行业。但在工业产酒过程中能引起果酒失光、混浊和出现沉淀，因此在果酒制备过程中需使用果胶酶，果胶酶[1]（Pectinase）是指分解果胶质的多种酶的总称，广泛存在于高等植物和微生物中，通常动物细胞不能合成这类酶。果胶酶在食品工业中，尤其是水果加工过程中应用十分广泛，水果汁液中含有果胶，用含有果胶的果汁制备的浓缩果汁粘稠，而且稳定性较差。果汁经果胶酶处理后，粘度迅速下降，过滤速度可提高10～20倍，澄清度达93%～98%，澄清倍数在4 ～21之间，经果胶酶澄清处理后的果汁，无论是直接还是浓缩后用来制成的成品果汁，均具有较好的稳定性。例如果胶酶应用于果汁加工有利于提高果汁产量，促进沉淀物分离，从而使果汁澄清，在桔子罐头加工中，采用果胶酶脱桔子囊衣比用酸碱法好，优点是能减轻对罐壁的腐蚀，利于贮存。因此，为研究果胶的生物降解机理，选育高产果胶酶的菌株并研究该酶性质是一项具有重要实际意义的工作。
从广义上讲，果胶酶可以被分为3种类型[2]：①原果胶酶：可以把不溶于水的原果胶分解为可溶于水的高聚合体果胶；②果胶酯酶：脱去果胶中的甲氧基基团，促使果胶的脱甲酯作用；③解聚酶：促使果胶中D-半乳糖醛酸的α-1，4糖苷键的裂解。目前国内外研究和应用较多的果胶酶产生菌是细菌和霉菌，也有链霉菌产生果胶酶的报道。已见报道的产果胶酶的霉菌种类大约包括20个属， 如曲霉属(Aspergillus sp.)、灰霉菌属(Botrytis sp.)、镰孢菌属(Fusarium sp.)、炭疽菌属(Colletotrichum sp.)、核盘菌属(Scletorium sp.)和玉圆斑菌属(Cochliobolus sp.)等。目前，黑曲霉、根霉和盾壳霉作为产果胶酶的菌株已经商品化。国内外对霉菌发酵产果胶酶的研究主要集中在曲霉属中，而曲霉属中研究最多的是黑曲霉。
粗毛栓菌（Trametes gallica）是一种降解木质纤文素能力强、产木质纤文素降解酶酶系齐全的白腐担子菌，在我国分布广泛，主要生长于杨树上，是杨木的一种主要生物降解者[3]。但研究表明，在以果胶作为唯一碳源的选择培养条件下，该菌也可大量生长，说明该菌也具有很强的降解果胶的能力。
1 材料与方法
1.1 菌株
白腐担子菌粗毛栓菌是山东省菏泽学院生命科学系教授孙迅博士于1997年8月在菏泽市北郊的护城堤上，从被砍伐的杨树上分离得到的。该野生菌株于同年经山东省科学院生物研究所微生物分类室的马启明先生对其进行了初步鉴定，定名为Trametes gallica[4](如下图)：
粗毛栓菌（Trametes gallica）在麦草上长出的子实体（来源于菏泽学院分子实验室）
1.2 主要仪器与试剂
研究中所用的主要仪器和试剂有: 生化培养箱HPS-160(哈尔滨东联电子技术公司), PHS-3C精密酸度计（上海康议仪器有限公司），HZQ-C空气浴振荡器（哈尔滨东联技术开发中心），恒温水浴锅（北京长安科学仪器厂），FA2004A分析电子天平（上海精天电原文请找腾讯752018766辣,文-论'文;网http://www.751com.cn 有限公司），立体自动电热压力蒸汽灭菌锅（上海申安医疗器械厂），冰箱， 锥形瓶, 碱式滴定管，铁架台，碘量瓶，移液枪，移液管，离心管,。果胶，酵母粉，琼脂等。
1.3 培养基
PDA培养基[5]（即马铃薯葡萄糖培养基，活化培养基），配方是马铃薯200g,蔗糖（或者葡萄糖）20g，琼脂15g,水1000mL,pH自然，具体方法是：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至1000mL，121℃灭菌30min。此培养基用于活化粗毛栓菌。
产果胶酶培养基[6]（液体培养基，配制1OOOmL）：果胶（0.5%）；(NH4)2SO4 (0.5%); KH2PO4(0.25%); MgSO4•7H2O (0.05%); NaNO3(0.02%); 微量元素（500×）（0.1%）1mL。配制成1OOOmL，分装于21个锥形瓶中。
微量元素母液（mg/L）:CaCl2•H2O 700; MnSO4•H2O 500; FeSO4•7H2O 500; CuSO4•5H2O 600; ZnSO4•7H2O 200; H3BO3 200; NaMoO4•2H2O 200; CoCl•6H2O 100。使用时，取2mL母液加入1000mL水中即可。
该培养基是以果胶作为唯一碳源的选择培养基，以该培养基培养粗毛栓菌，主要目的是使该菌产生大量的果胶酶，以供果胶酶性质初步研究。