粗毛栓菌产果胶酶初步研究+粗酶液制备+实验结果 第3页
1.4 实验操作技术路线
菌种培养基配制→分装，灭菌（121℃，30min）→接种→活化培养（26℃，5-7d）→接种→培养（26℃，200r/min）→取培养液（从培养后三天开始取）→ 离心（6000rpm,5min）→ 取上清液，弃沉淀→酶性质初步分析
1.5实验方法
1.5.1 粗酶液制备[7]
取培养三天的培养物10mL，离心（6000rpm，5min），弃沉淀，取上清，此即为测酶活所用的粗酶液。
1.5.2 粗毛栓菌果胶酶酶活测定方法
滴定法[8]：取1%果胶溶液4 mL，加入2mL粗酶液和2mL缓冲液，在40℃水浴中保温1h，取出后加热煮沸。冷却后，加1M碳酸钠溶液1mL，0.1N碘液4mL，摇匀，加塞，于暗处放置20min，加2N硫酸2mL，用0.05N硫代硫酸钠滴定至浅黄色 ，加0.5%淀粉指示剂1mL，继续滴定至蓝色消失。记录所消耗的硫代硫酸钠的毫升数（A）。空白试验加4mL果胶溶液、2mL缓冲液、煮沸失活的酶液2mL，滴定，记录所消耗的硫代硫酸钠的毫升数（B）。在上述条件下，每小时酶促催化果胶分解生成1mg当量游离半乳糖醛酸定为一个酶活力单位
果胶酶活力=（B-A）N*0.51/5*1
式中：B为空白消耗硫代硫酸钠的毫升数，A为试样消耗硫代硫酸钠毫升数 1为反应时间，5为酶液毫升数，0.51为1mg当量硫代硫酸钠相当于0.51mg当量游离半乳糖醛酸，N为硫代硫酸钠当量数。
1.5.3 温度对果胶酶活性的影响 在pH5.0、反应1h的条件下，分别测定在不同温度下的酶活。
1.5.4 pH对果胶酶活性的影响 在40℃、反应1h条件下，分别测定在不同pH值时的酶活。
1.5.5 金属离子对果胶酶酶活性的影响
将不同金属离子溶液与酶液混合，金属离子终浓度为2mg/100mL，40℃反应1h，按前述滴定法测定残余酶活力，以不加金属离子的酶液作对照。
1.5.6 产酶曲线的绘制
在 40℃ pH 5.0条件下,分别测定不同培养阶段的酶活力，对照组加等量失活酶液。
2 实验结果与分析
2．1温度对酶活性的影响
由图1可以看出温度对酶活的影响较大，在本实验条件下，果胶酶的最适作用温度为40℃，和其他报道相比略有不同，可能是不同菌株间有差别。
图1 酶的的最适温度曲线
2.2 pH值对酶活性的影响
图2表明，在40℃果胶酶在pH5.0表现出最大活性。
图2 酶的最适原文请找腾讯752018766辣,文-论'文;网
http://www.751com.cn pH值曲线
2.3不同金属离子对酶活性的影响
由图可以看出，当酶反应液内盐浓度为2mg/100ml时,K+ ,Fe3+有激活作用,Cu2+有较强的抑制作用，Na+、Mg2+、Ca2+、Zn2+的抑制作用不明显
图 3 不同金属离子对酶活的影响
2．4 产酶曲线 从图4可以看出，果胶酶从第三天起酶活迅速提高，第九天达到产酶高峰，且从第七天到十五天，酶活均文持在较高水平。
图 4 产酶曲线
3实验小结
各地果园土壤中蕴含着丰富的产果胶酶的微生物，从中筛选出酶活较高的菌株的可能性较大。笔者借鉴前人经验对粗毛栓菌所产果胶酶粗酶液进行了分析，发现该酶的最适pH值为5.0，最适温度为40℃，在培养9-11天酶活达到最大，K+ ,Fe3+有激活作用,Cu2+有较强的抑制作用，Na+、Mg2+、Ca2+、Zn2+抑制作用不明显。今后的工作，将果胶酶纯化，以便进一步做性质分析。
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