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氨基酸型肠内营养剂的胆碱含量分光光度法测定第5页

更新时间：2011-10-12: 来源：毕业论文

因此，现拟定方法线性范围为2.5～12.7 。
表3-1对照品浓度与吸光度关系
移取体积
（ml）对照品浓度
吸光度原文请+QQ324,9114辣.文^论,文'网
（A）
25.00 126.513 1.137
20.00 101.210 0.987
10.00 50.605 0.711
5.00 25.303 0.464
2.50 12.651 0.29
2.00 10.121 0.236
1.00 5.061 0.116
0.50 2.530 0.058
0.25 1.265 0.03
0.125 0.633 0.014
图3-1对照品浓度与吸光度关系

精密量取对照品（浓度506.05 ），精确移取0.50、1.00、2.00、2.50ml,分别至100ml容量瓶中，用MiliQ去离子水定容，按方法2.2.1.2测定，绘成标准曲线，结果见表3-2，图3-2。
表3-2对照品浓度
对照品浓度
吸光度(A)
12.651 0.29
10.121 0.236
5.061 0.116
2.530 0.058
图3-2线性方程
3.1.2 重复性及稳定性
对标准样品「批号：2010A06378,配置成浓度为5.159 」按现拟定方法重复测定6次，结果如表3-4，测得重复实验的标准偏差和相对标准偏差分别为0.075%及0.62%。对该标准样品连续3天进行测定，结果见表3-5，实验的相对标准偏差为0.62%，方法具有良好的精密度和稳定性。
表3-4重复性实验                         表3-5稳定性实验
次数标准样品吸光度 ( A) 平均 RSD
(%) 标准偏差
(%)毕业论文http://www.751com.cn/
1 0.121 0.121
0.62
0.075
2 0.122
3 0.120
4 0.120
5 0.121
6 0.121
实验时间标准样品含量（）
平均原文请+QQ32491'14辣.文^论,文'网
(%) RSD
(%)
（第一天10A.M） 5.16 5.15 0.46
5.20
（第二天10A.M） 5.12
5.12
（第三天10A.M） 5.16  5.16
3.1.3 显色时间
准确称取对照品标准溶液2ml至于100ml容量瓶，加入胆碱B酶试剂2ml，用水定容,配成10μg/ml溶液，振摇混合约3秒，分别在30s、60s、90s时用500nm波长对上述溶液进行吸光度测定，测定数据见图3-3：
因酶反应的速度较快，实验对时间的控制要求非常严格，通过实验数据，显色反应在混合60s后趋于稳定，所以吸光度测定时间要迅速并且保证相同测定时间1分钟，以保证实验结果的一致性。
3.1.4回收率
将相当于标准样品浓度1，1.2，1.4倍的胆碱对照品加入到供试品溶液中，按现拟定方法进行回收率的测定。结果如表3-3，回收率为95.33-104.05%，可以确认，本试验方法回收率良好。