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ARMS-PCR 快速检测 p53 基因外显子突变热点的快速鉴定

更新时间:2011-10-12:  来源:毕业论文
实验仪器
表2-2  主要设备及其生产厂家
仪器名称 型号 厂家
PCR仪 5333 Eppendorf
电热恒温鼓风干燥箱 DHG-9240A 上海恒科
电泳仪 EPS300 Tanon
凝胶成像仪 1600 Tanon
电子天平 TE412-L Sartorius
超速离心机 Centrituge 5424 Eppendorf
电热恒温水浴锅 DK-S11 上海森信
电热恒温培养箱 DRP-9052 上海森信
恒温摇床 TCYQ 太仓市实验设备厂
蒸汽灭菌器 G154DW Zealway
刨冰机 YN-168 上海因纽特
恒温金属浴 R1 深圳华因康
冷冻离心机 Centrifuge 5804R Eppendorf
超净工作台 SW-CJX-1F 苏州汇通
2.2实验方法
2.2.1实验流程示意图
图2-2 实验流程示意图
2.2.2基因组DNA的提取
采集收取正常人的血液和癌症患者石蜡包埋组织的样品,编号提取基因组 DNA 备用。具体操作方法如下所示:
2.2.2.1正常基因组DNA的提取
标准抽提步骤:
①. 加500 μL Buffer AP1到1.5 mL离心管中;
②. 加250 μL抗凝全血到Buffer AP1中,用移液器来回吸注几次,以彻底溶解残留在吸头上的血液。盖紧离心管盖子,旋涡振荡10s;
③. 加100 μL Buffer AP2,旋涡振荡10 s;12,000×g 离心10 min;
④. 制备管置于2 mL离心管,将步骤③的滤液加入到制备管中,12,000×g离心 1 min;
⑤. 弃滤液,将制备管置回原2 mL离心管中,加700 μL已加无水乙醇的Buffer W1A,室温放置2 min,12,000×g离心30 s;原文请+QQ324,9114辣.文^论,文'网
⑥. 弃滤液,将制备管置回到原2 mL离心管中,加800 μL已加无水乙醇的 Buffer W2,12,000×g 离心 1 min;
⑦. 将制备管置回2 mL 离心管,加500 μL Buffer W2 到制备管,12,000×g 离心1 min。
⑧. 弃滤液,将制备管置回原2 mL离心管,12,000×g 离心 1 min;
⑨. 将制备管置于另一洁净的1.5 mL 离心管中,在制备管膜中央加200 μL  70℃预热的Buffer TE,室温静置 1 min。12,000×g 离心 1 min 洗脱基因组 DNA。

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