纤文素霉的筛选及产酶条件研究的方法
纤文素霉一般生长于长期有腐叶或者腐烂植被或粪便聚集地的地方例如:农村用来囤积稻草的固定地点,长期的动物养殖场的土壤里等。从距地表10cm的地方采取样本进行试验。
纤文素霉从土壤里分离用蒸馏水为溶剂,震荡,然后取菌悬液放进三角瓶进行摇床培养,然后取出进行固体培养基进行筛选培养,分初筛和复筛,初筛用直接的纤文素提供培养,方便选出能分解纤文素的菌株,复筛采用植被残骸进行,以此来选出活性强的高产菌株。
在一般培养温度下呈固体状态的培养基都称固体培养基。固体培养基可以分为两类:一类是用天然的固体状物质制成的,如用马铃薯块、麸皮、米糠、豆饼粉、花生饼粉制成的培养基,酒精厂、酿造厂等常用这种培养基;另一类是在液体中添加凝固剂而制成的,如实验室中常用的琼脂固体斜面和固体平板培养基。这种培养基广泛用于微生物的分离、鉴定、保藏、计数及菌落特征的观察等。
固体培养基的凝固剂一般不是微生物的营养成分,只起固化作用。理想的凝固剂应具备以下条件:不会被微生物分解利用;不会因高温灭菌而受到破坏;在微生物生长的温度范围内保持固体状态;对微生物及操作人员均无毒害作用;透明度好、凝固力强;价格低廉,配制方便。常用的凝固剂是琼脂。琼脂的主要成分是硫酸半乳聚糖,绝大多数微生物都不能分解利用它。琼脂的熔点为96℃,凝固点为40℃,因此,在一般的培养条件下都呈固体状态,而且透明度强。正是这些优良特性,使琼脂取代了早期使用的明胶而成为常用的凝固剂。
然后观察测量培养后的透明圈大小,大的长的好活性强,挑选后通过液体培养增殖的方法使其增殖,然后通过离心的菌液测OD值,计算酶活度。
呈液体状态的培养基,叫液体培养基或培养液,发酵液。液体培养基因营养物质分布均匀,与菌体表面接触充分,还能大量溶解微生物的代谢产物等优点,广泛用于微生物的生理、代谢研究以及大规模的工业化生产中。
1.6 本实验研究内容
本实验采用通过离心分离,固体/液体两种培养方法筛选及增殖菌种以达到实验用的目的并改变碳氮源及pH和温度来研究其最佳的产酶条件。
2实验材料和方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 实验材料
表2.1 实验材料
原料名称 产地
叶子
土壤
玉米粉
树叶
公路交接处的树叶积聚地
市购
2.1.2 实验试剂
表2.2 实验试剂
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