纤文素酶菌株的筛选及产酶条件的研究 第6页

初筛、复筛及条件
当上述培养完成时可以拿出培养箱然后用上述培养的菌液涂布于初筛培养基上进行为期7天得初筛，然后观察初筛结果，取透明圈大的做增殖培养7天，7天每隔2天取5ml菌液放入50ml的增殖培养基，这样来上3次，每次取4个平板，每一个平板取0.5ml稀释液涂布于固体复筛培养基，倒置平板培养，温度30℃和培养时间7天，然后拿出复筛结果挑选大的菌落及测量透明圈进行再一次的增殖培养文期2天，在全温振荡培养箱中36℃，160r/min频率下培养[1]
2.2.4 OD值得测定
上述培养好的菌液，取4支带有10ml刻度的试管，每支试管加0.5ml酶液（其中1支对照，3支平行试验），样品管置于50℃水浴中，预热2min，对照管置于沸水浴10min，然后4支试管中加2ml已预热至50℃的1%羧甲基纤文素钠为底物溶液，样品管置于50℃水浴准确及时3min取出，流水迅速冷却，用蒸馏水定容至10ml，摇匀后用分光光度计于480nm处测定吸光度值。1min生产1ug葡萄糖定义为一个酶活力单位。[4]

2.2.5 酶活性的计算
根据以下公式计算酶活性：
浓度（U/L）=待测物吸光度△A×K                             （2-1）
K= VT *1000000/VS*ε*d                                       （2-2）
VT=反应液总体积（ul）
VS=样本体积（ul）
d=比色杯光径（cm）
ε=摩尔消光系数

A=-logT=-log(I/I0)=log(I0/I)=εbc                                 （2-3）
b为光径 c为浓度百分比

本实验光径为0.5cm  溶液浓度百分比为5%本文来自辣,文'论#文^网，毕业论文 www.751com.cn 加7位QQ324,9114找源文
2.3 纤文素霉的初筛具体步骤、结果
2.3.1 工艺流程
采集土样→放入无菌水中→振荡→提取10ml→放于90ml液体增殖培养基中→摇床36℃160r/min培养→14天→培养皿灭菌（配置固体培养基）→培养基倒入培养皿→冷却凝固→取出菌液涂布于配置的固体培养基上→生化培养箱30 ℃→7天→取出→查看透明圈及测量、挑选进入复筛的菌落。
2.3.2 初筛结果
实验结果不慎理想，并没有透明圈的产生，还长了些黄色的小颗粒的状生物，进行深入揣测，可能是土壤中并无此菌或含量微小
第二批的结果同样并无透明圈并产生黄色小颗粒状物质
第二组同步的第三组状况相同，第三组是不同于第一、二组的地点采集的，但是一样的状况，猜测可能是土壤菌株的含量问题

上一页  [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7] [8] 下一页

纤文素酶菌株的筛选及产酶条件的研究 第6页下载如图片无法显示或论文不完整，请联系qq752018766