按照配方配制PDA液体培养基,并将配好的培养基分装与大小适宜的锥形瓶中,置于高压蒸汽灭菌锅中121.3℃灭菌20min,备用。
1.4.2 菌悬液的制备及浓度的测定
(1)用接种环挑取棉花黄萎病菌菌丝扩繁到灭菌的液体PDA培养基中,放在24℃,130r/min的恒温振荡培养箱中培养两周,作为本实验的初始菌悬液。
(2)血球计数板测初始菌悬液的浓度:在液体震荡培养时,棉花黄萎病菌通常以菌丝体的形式存在,但个体大小不一,计数时只计算相同大小的个体,增大准确率。测得菌悬液的初始浓度为每毫升1×105个左右时,将初始菌悬液放在4000r/min下离心10min,将分离得到的菌体溶解在蒸馏水中,再次测菌悬液浓度为每毫升2.6×105个,制成13瓶这样浓度的菌悬液,每瓶50mL,放入4℃冰箱保存备用。
1.4.3 光催化剂杀菌性能测试
(1)菌悬液处理:分别称取以下系列剂量:0.005g、0.010g、0.015g、0.020g、0.025g的CNTs/BiOI复合物和BiOI。在无菌条件下,将以上称量好的10份光催化剂加入10瓶菌悬液中,并混合均匀。在处理的菌悬液中,两种光催化剂的浓度梯度均为0.100g/L、0.200g/L、0.300g/L、0.400g/L、0.500g/L;菌悬液浓度不变。
其中空白组只加光照,不加光催化剂;对照组只加光催化剂,不加光照;实验组同时加光催化剂和光照。
(2)杀菌率测定:将处理好的菌悬液放在恒温(24℃)磁力搅拌器上均匀搅拌,同时用3000-5000Lux的日光灯模拟太阳光作为光源,光源距离菌悬液10cm。在开灯的瞬间开始计时,分别在光照1h、2h、3h、4h、5h时取5mL菌悬液,用血球计数板计数,计算杀菌率来评价杀菌效果。
杀菌率计算公式:杀菌率=[(P-Q)/P]×100%
P代表空白组菌悬液血球计数,Q代表实验组血球计数。
(3)电导率测定:从取出的5mL菌悬液中取1mL放入干净试管,加入1mL蒸馏水,25℃恒温保温5h,测定电导率。