2.2.1茶渣的制备
取茶叶若干，开水浸泡45min，重复2~3次，过滤，将剩余茶渣置于60℃电热鼓风干燥箱内，直至烘干，之后使用粉碎机粉碎，茶渣粉待用。
2.2.2用蛋白酶法提取茶渣中蛋白质
茶渣粉0.02g→加缓冲液配成一定的液固比（体积：质量）→调节适当的pH、温度→加酶(按质量茶渣质量添加)提取→沸水浴灭酶→离心分离→蛋白质提取上清液→测定蛋白质含量。
在调整pH后加入蛋白酶，并迅速搅匀，反应中严格控制温度和pH。终止是用沸水浴灭酶15min，然后离心分离，测上清液中蛋白质含量,根据吸光度数值计算蛋白质提取率。
2.2.3 Bradford浓染液的配制
将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，置于阴凉避光处保存。
2.2.4缓冲液的配制
取NaH2PO4•2H2O 31.21g，溶于少量蒸馏水中，定容至1L；取Na2HPO4•12H2O 71.64g，溶于少量蒸馏水中，定容至1L。
表2.3 不同pH缓冲液配比
pH 0.2mol/L Na2HPO4（ml） 0.2mol/L NaH2PO4（ml）
6.0 12.3 87.7
6.5 31.5 68.5
7.0 61.0 39.0
7.5 84.0 16.0
8.0 94.7 5.3
2.2.5蛋白质标准曲线的绘制
取5只试管，按下表依次加入试剂，将试管摇匀，静置20min后，用比色法在590nm下测定吸光度A。以A595为横坐标，标准蛋白质浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
表2.4 标准曲线的绘制
试剂\标号 1 2 3 4 5 6
酪蛋白（1mg/ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
水（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
考马斯G250（ml） 5 5 5 5 5 5
2.3 实验内容
2.3.1不同种类的蛋白酶对茶渣中蛋白质提取率的影响
分别选用中性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶，在各自最适温度和pH条件下，以添加量2%、液固比30:1（mL/g）,提取3h，测定蛋白质的提取率。
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