超声波提取紫露草总黄酮及其鉴别
摘要：目的 为充分利用紫露草植物资源，避免资源的浪费，探讨紫露草总黄酮的提取及鉴别方法。方法 采用超声波乙醇浸提法从紫露草中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用分光光度法测定含量。结果 测得样品中总黄酮的含量C=0.1562mg/ml，回收率为97.4%，其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取紫露草黄酮类物质的有效途径。
论文关键词：超声波提取,紫露草,总黄酮,鉴别
*通讯作者：黄锁义，教授，硕士研究生导师.
紫露草（Tradescantiareflexa）别名紫花鸭草，为鸭跖草科多年生宿根草本，原产于北美，我国引种栽培。紫露草茎通常簇生，紫露草性喜凉爽，湿润气候，耐寒性较强，适应性广，耐旱、耐贫瘠、耐盐碱，几乎没有病虫害。最常见的是适应性非常强的开蓝紫色花的品种。我国各地均有栽培。紫露草性味淡、甘、凉，可以活血、利水、消肿、散结、解毒。能治疗痈疽肿毒、结核、淋病等疾病。
近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响。但超声技术应用于提取紫露草叶中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取紫露草总黄酮及鉴别。
1仪器与试剂
1.1仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（超声工作频率40KHz，昆山市超声仪器有限公司）；UV-755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHB-III循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
1.2试剂95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜紫露草采自右江民族医学院校园内。
2方法与结果
2.1总黄酮成分提取取新鲜紫露草，烘干，粉碎。称取紫露草粉末6g，加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤。滤渣再加80ml95%乙醇，超声波提取2.5h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5~7ml为止，放置100ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
2.2测定方法依据以芦丁为对照品测定木瓜叶中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
2.3定量实验—总黄酮的含量测定
2.3.1波长的选择取样品液适量，在0.30ml5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420~700nm波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物于510nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
2.3.2标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00ml于10.00ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加10%硝酸铝溶液0.30ml，摇匀，静置6min；再加4%氢氧化钠溶液4.00ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min，以试剂作空白，于510nm处测定吸光度，见表1
表1紫外可见分光光度计测定吸光度
C（mg/ml）0.00 0.005 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05
吸光度 0.000 0.060 0.122 0.250 0.365 0.485 0.603
根据上表得回归方程：A=-2.9069×10+12.05C，r=0.9999。
2.3.3提取物含量的测定精密吸取样品液0.50ml，置10.00ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.097，根据回归方程：A=-2.9069×10+12.05C，计算样品中总黄酮的含量C=0.1562mg/ml。
2.3.4回收实验精密量取样品液1.00ml，加入标准芦丁对照品1.00ml（0.10mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为97.4%。
2.4定性实验—总黄酮的鉴别
2.4.1颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。
浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。
三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。
乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。
盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
2.4.2纸层析取样品溶液10l点在滤纸上。用正丁醇：醋酸：水=4：1：5（体积比）为展开剂，上行展开5h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
3讨论
3.1实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为97.4%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
3.2黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。
黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。紫露草分布广泛，本文实验结果表明，紫露草中含有较为丰富的黄酮。因此，紫露草具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。
参考文献
1 张金芝,迟淑英,王 东,等.紫露草在北方园林绿化中的开发利用初探[J],山东林业科技,2003,(3):40.
2 杨 霞 ,徐飞燕,沈国正.美洲无毛紫露草矮化试验[J].浙江林业科技,2005,25(4):27-28,31.
3 谭树辉,黄海波.中草药野外识别手册[M].广州:广东科技出版社,2004.1,210.
4 刘祥义. 超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究[J]. 云南化工,2003,30(1):27.
5 谢明杰,宋 明,邹翠霞,等. 超声波提取大豆异黄酮[J].大豆科学,2004,23(1):75.
6 夏杏洲,张 辉,魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究[J].食品研究与开发,2002,23(5):35.
7 黄锁义,唐玉莲,黎海妮,等.龙眼壳总黄酮提取及鉴别[J].中药材,2006,29(8):767.
8 黄锁义,阳文辉,李卫彬,等.超声波提取九里香总黄酮及其鉴别[J].时珍国医国药,2006,17(3):395.