新生儿筛查G6PD时标本递送方式的探讨
【摘要】 目的 通过分析不同方式递送血片标本的G6PD 筛查结果，探讨递送方式对G6PD 筛查检测值的影响，改善血片标本的递送方式，提高新生儿G6PD 筛查的准确性。方法 按递送方式将血片标本分成两组，使用荧光定量法测定血片标本的G6PD 值，然后对两组的结果进行统计学分析。结果 递送方式影响血片标本到达筛查中心的时间，挂号信件方式达到筛查中心时间长，G6PD筛查的假阳性率高；特快专递方式到达筛查中心时间短，G6PD筛查的假阳性率低；在筛查中心采集的血片G6PD筛查结果最准确。结论 缩短血片标本递送到筛查中心的时间可以降低G6PD筛查的假阳性率。
【关键词】 新生儿； G6PD筛查； 标本递送
葡萄糖6磷酸脱氢酶（glucosephosphate dehydrogenase, G6PD）缺乏症是一种红细胞酶的缺陷病，系一种X性连锁不完全显性遗传病，为华南及西南各省最常见的遗传病之一。患者在某些诱因（药物或蚕豆）下发病，故又称为蚕豆病。发病的临床表现为急性溶血性贫血和由此产生的高胆红素血症，此症在新生儿期可导致核黄疸而后遗智力低下。此外，溶血致红细胞破坏时，具有促凝活性的红细胞基质(磷脂等)大量释放至血循环，通过磷脂与补体旁路激活凝血系统，形成致栓性的高凝状态，危害新生儿的健康［1］。由于此症在我省常见，新生儿筛查此症可有效预防其发病，因此我市将其定为新生儿疾病筛查的疾病之一。用于筛查的血片标本由接产医院采集后递送到我院的市新生儿疾病筛查中心，递送过程血片不能做到4℃冰箱保存，不同的递送方式使得血片标本到达筛查中心的时间不同从而影响G6PD的筛查结果。为了了解不同递送方式对G6PD筛查结果的影响，我筛查中心于2007年1月开始在我市南海区桂城医院改变标本递送方式，由原来的挂号信件方式改为专收专递方式，并对不同递送方式的筛查阳性结果与召回复查结果进行了统计学分析，探讨递送方式对G6PD 筛查检测值的影响。
1 资料和方法
1.1 对象 我筛查中心2006年1～4月和2007年1～4月收到的南海区桂城医院采集的新生儿筛查血片标本以及G6PD筛查阳性新生儿被召回到筛查中心采集的血片标本。
1.2 血片采集要求 按照卫生部《新生儿疾病筛查血片采集技术规范》，在新生儿生后48 h～7 d内采集足跟血3滴于滤纸上，血斑直径大于8 mm，血滴自然渗透，滤纸正反两面血斑一致，血斑无污染，自然条件下凉干2 h置于塑料袋内。
1.3 血片递送方法 2006年1～4月使用挂号信件方式，具体做法是将装有血片的塑料袋通过邮局以挂号信的形式寄达我筛查中心。2007年1～4月使用专收专递方式，具体做法是将装有血片的塑料袋由快递公司每周日、三上门收取并送达我筛查中心。新生儿召回者在筛查中心采血并于当天进行G6PD检测。
1.4 实验方法
1.41 仪器和材料 ① 滤纸片采用美国S&S903滤纸,② 试剂采用美国Wallac公司生产的G6PD酶活性测定反应试剂,③ 免疫荧光读数仪（芬兰Labsystems公司生产的FLUOROSKAN荧光读数仪）,④ 恒温振荡器（芬兰Labsystems公司生产的iEMS Incubator / Shaker HT）,⑤ 打孔器（内径3 mm）。
1.4.2 实验原理 机体G6PD催化二磷酸己糖旁路反应的第一步：G6P底物在G6PD催化下转变成6PG，同时伴随发生NADP减少，NANPH（可发荧光）增加。筛查血斑标本与底物试剂G6P和NADP在室温下混合30 min可发生上述反应，加入铜溶液使反应终止，用荧光仪在波长355 nm激发光和波长460 nm发射光下测定反应物荧光。通过标准曲线得出未知样本和质控品中G6PD浓度（u/g Hb），G6PD低于切值者为检测异常。
1.4.3 实验步骤 根据G6PD测定试剂盒内提供的实验操作步骤进行实验操作，把新生儿筛查滤纸干血片用专用标本打孔器打取直径为3 mm滤纸干血片一份，放置于96孔反应微板中，然后加入G6PD酶反应混合液100 μl/孔，在室温下用恒温振荡器以恒温25℃、振速1 150 r/min的速度振荡30 min，然后甩掉附在支架上的滤纸片，在微板反应孔中加入200 μl/孔铜试剂反应终止液，轻微手工摇动反应板放置15 min后于30 min内用Labsystems荧光读数仪，以激发波355 nm和发射波460 nm的波长进行荧光读数测定。
1.5 实验结果判定标准 我筛查中心实验室G6PD筛查切值为2.2 u/g Hb，＞2.2 u/g Hb为结果正常，≤2.2 u/g Hb为结果异常。
1.6 统计学方法 使用SPSS 11.0 FOR WINDOWS 统计软件包进行u检验和χ2检验。
2 结 果
2.1 一般情况和血片收到天数。南海区桂城医院距离筛查中心约10公里。2006年1～4月收到合格血片1 135张，每张血片的采血时间至收到时间的平均天数为10.6±2.2 d；2007年1～4月收到合格血片1 293张，每张血片的采血时间至收到时间的平均天数为3.8±0.9 d。血片平均收到天数经大样本u检验，u=97.28,P<0.001，2007年血片平均收到天数明显缩短。
2.2 筛查结果。2006年1～4月所收到的血片的G6PD筛查结果异常107例，筛查异常率为9.4%，召回87例，召回率为81.3%，召回复查G6PD结果正常46例，占召回数的52.9%，异常41例，占召回数的47.1%。2007年1～4月所收到的血片的G6PD筛查结果异常84例，筛查异常率为6.5%，召回69例，召回率为82.1%，召回复查G6PD结果正常25例，占召回数的36.2%，异常44例，占召回数的63.8%。经χ2检验，2006年与2007年的筛查异常新生儿召回率无统计学差异（χ2=0.022，P=0.882）；2006年与2007年筛查异常新生儿复查仍为异常的发生率有统计学差异（χ2=4.297 P=0.038），2007年筛查异常及复查异常的一致性高于2006年。
3 讨 论
3.1 血片递送是G6PD检测的影响因素之一。G6PD试剂盒说明书要求采血后2 h内自然干燥后放4℃冰箱贮存，7 d内测定结果。这样的要求在新生儿疾病筛查的血片标本递送过程暂时未能做到，卫生部《新生儿疾病筛查血片采集技术规范》采血工作质量要求滤纸干血片应在采集后5个工作日内递送，3 d内必须达到筛查检测机构[2]。我市南海区桂城医院的血片标本的递送方式由挂号信件方式改为专收专递方式后，血片收到时间由平均10.6 d缩短到3.8 d，速度大大提高，而且符合卫生部《新生儿疾病筛查血片采集技术规范》的要求。新生儿召回者的采血和G6PD检测在当天完成，因而检测结果最准确。
3.2 G6PD缺乏症是华南及西南各省最常见的遗传病之一。我国南方七省、区新生儿协作组1984年开展对此病的研究测得此病的发病率以广东（6.3%~5.83%）、广西（9.2%）、贵阳（3.77%）为高[3]。我市南海区桂城医院2006年1～4月的G6PD筛查异常率为9.4%，高于协作组的研究结果；2007年1～4月G6PD筛查异常率为6.5%，在相邻两年同期，血片采集贮存条件未发生改变的情况下，G6PD筛查异常率明显下降。在召回的新生儿复查G6PD，在筛查异常及复查异常的一致性的对比方面，2007年(63.8%)高于2006年(36.2%)，可以认为2007年的假阳性率低于2006年，专收专递方式可以降低筛查的假阳性率。
3.3 新生儿疾病筛查所使用的滤纸干血片送到筛查中心的时间过长，会导致血斑的溶解度及G6PD酶活性下降，使G6PD的检测结果异常率上升，假阳性率增加[4]，本研究的结果与此相符。假阳性结果的出现会造成召回率增加，不仅使筛查成本增加，同时也为筛查对象带来不必要的麻烦和心理上的负担。因此，采取血片专收专递方式，缩短血片送达时间，可提高G6PD检测的准确性，值得在筛查中心推广使用。
【参考文献】
[1] 刘泽霖,贺石林,李家增.血栓性疾病的诊断与治疗［M］.第二版.北京：人民卫生出版社，2006.
[2] 卫生部.《新生儿疾病筛查技术规范》[M].新生儿疾病筛查技术培训学习班教材，2005,9:130131.
[3] 金汉珍,黄德珉,官希吉.《实用新生儿学》[M]. 第3版. 北京：人民卫生出版社，.2003.
[4] 江剑辉.新生儿干血斑G6PD筛查检测及其室间质量保证[M].新生儿疾病筛查技术培训学习班教材.2005,9:66