4E表达与非小细胞肺癌预后的相关性
[摘要] 目的 探讨真核细胞起始因子-4E（eIF-4E）在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达情况及其与预后的关系。 方法 选择2009年1月～2010年12月温州医科大学附属黄岩医院外科手术切除的NSCLC组织60例以及30例癌旁正常组织样本作为对照，采用免疫组化法检测NSCLC组织以及癌旁正常肺组织中elF4E的表达。NSCLC患者术后均接受2周以上的榄香烯联合顺铂化疗，对所有患者均进行系统地随访评价，分析eIF-4E的表达与无瘤生存期（DFS）和总生存时间（OS）的关系。 结果 eIF-4E在NSCLC癌组织中的表达率为80.00%，显著高于正常癌旁组织（33.33%），差异有高度统计学意义（P < 0.01）。年龄≥60岁及TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表达率明显高于年龄<60岁及分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，差异均有统计学意义（P < 0.05）。eIF-4E低表达患者的DFS和OS均显著高于高表达者，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论 eIF-4E基因在NSCLC组织中呈高水平表达，榄香烯联合顺铂化疗后eIF-4E低表达患者的DFS和OS明显延长。eIF-4E高表达水平可作为NSCLC不良预后的预测因子。
[关键词] eIF-4E基因;表达;非小细胞肺癌;预后
[中图分类号] R734 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2015）01（a）-0012-04
Expression of eIF-4E in non-small cell lung cancer and its correlation with prognosis
WANG Binliang LI Xiaobo KONG Yiming ZHANG Rongying
Department of Respiratory Medicine， the Affiliated Huangyan Hospital of Wenzhou Medical University the First People's Hospital of Taizhou City， Zhejiang Province， Taizhou 318020， China
[Abstract] Objective To investigate eIF-4E expression in patients with non-small cell lung cancer （NSCLC）， and its correlation with prognosis. Methods Tumor tissues were collected from 60 NSCLC patients who underwent surgical resection from January 2009 to December 2010 in the Affiliated Huangyan Hospital of Wenzhou Medical University， and 30 adjacent normal tissues samples were also collected. The expression level of eIF-4E in NSCLC tissues and adjacent normal tissues were measured by immunohistochemical method. All the NSCLC patients after resection were subject to treatment with elemene plus cisplatin for more than 2 weeks. A systematic follow-up evaluation was also performed to investigate the correlation of eIF-4E expression level with disease-free survival （DFS） and overall survival （OS）. Results The expression rate of eIF-4E in the tumor tissues （80.00%） was significantly higher than that in adjacent normal tissues （33.33%）， the difference was statistically significant （P < 0.01）. The eIF-4E high expression rate of the patient with age≥60 years and clinical stage of Ⅲ-Ⅳ was higher than whose age<60 years and clinical stage ofⅠ-Ⅱ， the differences were statistically significant （P < 0.05）. The DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level were significantly larger than those of patients with high eIF-4E expression level， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion eIF-4E is highly expressed in NSCLC tissues; the DFS and OS values of patients with low eIF-4E expression level are significantly larger. High eIF-4E expression level may be an independent predictor of poor NSCLC prognosis. [Key words] eIF-4E gene; Expression; NSCLC; Prognosis
目前，肺癌是发病率和病死率最高的恶性肿瘤，其引起的死亡在各种癌症导致的死亡中居首位，这与其肿瘤细胞侵袭性和转移性的生物学特征密切相关[1]。非小细胞肺癌（non-small cell cancer，NSCLS）约占肺癌的80%，大部分患者发现患有非小细胞肺癌时已属于晚期，因此化疗是治疗非小细胞肺癌的主要方法[2]。真核细胞翻译起始因子-4E（eukaryotic initiation factor-4E，eIF-4E）是相对分子质量25 000、碱基序列>50 kb、包括7个外显子和6个内含子的多肽[3]，在许多肿瘤中过度表达，并且与多种恶性肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。eIF-4E在诸如甲状腺癌、食管癌、前列腺癌、膀胱癌、子宫颈癌、肺癌、白血病以及胆管癌等恶性肿瘤和肿瘤旁组织中过度表达并与肿瘤的侵袭转移能力呈正相关。eIF-4E基因科是肺癌演进过程中重要的标志物，可指导非小细胞肺癌的生物治疗并为其临床分期和预后判断提供参考价值，在肺癌的复发和转移方面有着重要的意义。本研究EIF4E基因在NSCLC的表达及其与疗效及预后的关系，现将结果报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
http://www.751com.cn/ 选择2009年1月～2010年12月于温州医科大学附属黄岩医院（以下简称“我院”）进行外科手术切除的60例非小细胞肺癌组织样本，同时收集30例癌旁正常组织（距离癌组织大于5 cm以上的组织）作为对照。所有患者术前均未进行过化疗或者靶向治疗。根据2002年美国癌症联合会和国际抗癌联盟制订的TNM分期，Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期33例，根据2002年WHO分类标准，60例非小细胞肺癌组织中鳞癌29例，腺癌31例，低分化36例，中高分化24例。60例非小细胞肺癌组织中男31例，年龄35～83岁，平均（56.47±18.85）岁，女29例，年龄32～86岁，平均（58.75±19.23）岁。30例癌旁正常组织中男18例，年龄34～85岁，平均（58.94±19.62）岁，女12例，年龄33～81岁，平均（55.84±18.52）岁。非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织性别、年龄等基本资料比较差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。本研究经我院伦理委员会通过，患者均知情同意并签署知情同意书。
1.2 方法
1.2.1 治疗方法 60例患者均在术后接受2～4周期的榄香烯（大连金港制药公司，生产批号：0705131）联合顺铂（山东德州制药厂，生产批号：9050212DC）化疗：榄香烯：125 mg/m2，d1、d8;顺铂;30 mg/m2，d1～d3。药物均静脉滴注给药，所有患者均接受至少2周的化疗，对于耐受良好患者进行3～4周期的化疗。
1.2.2 检测方法 将获得标本制成3 μm厚的石蜡切片，常规脱蜡后使用苏木精染色和DAB显色（北京中杉金桥生物科技有限公司），脱水后二甲苯透明并以中性树脂封固后置于显微镜下观察。
1.2.3 结果判读方法 以细胞中出现棕黄色颗粒为阳性。免疫组化标准[5]：每例标本均在400倍视野下选取500～1500个肿瘤细胞进行阳性细胞染色强度的观察并计算阳性细胞的百分数。按阳性细胞染色强度：无着色为0分;黄色为1分;棕黄色为2分;深棕色或棕褐色为3分。按阳性细胞百分数：0%～10%为0分，>10%～25%为1分，>25%～50%为2分，>50%～100%为3分。以按阳性细胞染色强度得分和按阳性细胞百分数得分之和为最终结果。0～1分：阴性（-），2～3分：弱阳性（+），4～5分：中阳性（++），6分：强阳性（+++）。-～+为低表达，++～+++为高表达。
1.2.4 预后评价方法 无瘤生存期（DFS）[4]：从开始化疗至转移、复发或死亡之间的时间。总生存时间（OS）[4]：从开始化疗至死亡或者最后1次随访之间的时间，最后1次随访时间为2014年3月20日。
1.3 统计学方法
采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用t检验;计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 真核细胞翻译起始因子-4E在癌组织以及正常肺组织中的表达
非小细胞肺癌组织中eIF-4E基因的阳性表达率为80.00%（48/60），显著高于癌旁正常组织的33.33%（10/60），差异有高度统计学意义（χ2=9.38，P < 0.01）。见图1（封四）。
2.2 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者临床特征的关系
非小细胞肺癌组织中eIF-4E表达与患者的性别、病理类型和分化程度无关（P > 0.05），年龄≥60岁及TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期患者的eIF-4E高表达率明显高于年龄<60岁及分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，差异均有统计学意义（P < 0.05）。提示IF-4E表达与患者的年龄及临床病理分期有关。见表1。
2.3 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者的无瘤生存期和总生存时间关系分析
与eIF-4E基因高表达患者比较，eIF-4E基因低表达患者的DFS和OS均延长，差异均有统计学意义（P < 0.05）。见图2、3。
图2 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者无瘤生存期的关系
图3 真核细胞翻译起始因子-4E的表达与患者总生存时间的关系
3 讨论 肺癌是发病率和病死率增长最快的恶性肿瘤，目前在世界范围内已成为严重危害人类生命和健康的主要疾病，肺癌的发病率和病死率在男性中均占第一位，在女性中，肺癌的发病率仅次于乳腺癌。肿瘤的形成是一个复杂的多阶段连续过程，受多种因素的影响。目前对肺癌的治疗仍缺乏有效的方法，对于失去手术机会的患者来说药物治疗的有效性紧密关联着其生存质量及生存期。对肺癌的转移机制、预后影响因素和药物对肺癌细胞作用的分子机制的研究可为肺癌的药物治疗提供依据[6]。eIF-4E是真核细胞翻译起始和调控的核心成分，它与mRNA 5'端帽子结构结合，在蛋白质翻译起始过程中发挥重要作用[7]。有研究进展表明eIF-4E是影响肿瘤的生长、侵袭、演进等生物学行为的肿瘤相关因子，在许多肿瘤中过度表达且与多种恶性肿瘤的发生、浸润和转移密切相关[8]，其过度表达成为肿瘤恶性改变及判断其恶性程度的一个重要分子标志，可为抗肿瘤治疗提供新思路[9-10]。通过反义mRNA介导降低eIF-4E的表达可以抑制癌细胞的肿瘤特性，有研究表明，可以通过降低eIF-4E的表达抑制头颈部恶性肿瘤细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞等多种肿瘤细胞的生长、侵袭[11-13]。榄香烯是在中药姜科植物温莪术的挥发油中提取的有效成分，是由α-榄香烯、β-榄香烯、δ-榄香烯和γ-榄香烯组成的复合物，是临床上一种被广泛应用并取得了治疗效果的广谱抗肿瘤药物，β-榄香烯通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡来实现其在甲状腺癌中的抗肿瘤效果[14]，在临床上其不仅具有较强的抗肿瘤作用，而且可逆转化疗产生的多药耐药性[15]。目前关于eIF-4E基因在非小细胞肺癌细胞内的表达及其与榄香烯联合顺铂治疗非小细胞肺癌的效果与预后关系的研究甚少，明确eIF-4E基因在非小细胞肺癌细胞内的表达及其与榄香烯联合顺铂治疗非小细胞肺癌的效果与预后关系可为非小细胞肺癌的治疗提供依据。
本研究结果显示，eIF-4E基因在非小细胞肺癌组织中呈现高表达，提示eIF-4E基因在非小细胞肺癌的发生发展过程中可能起着重要的作用。eIF-4E的表达与患者的性别、病理类型和分化程度无关。本研究结果亦发现，年龄较大以及分化等级较高的非小细胞肺癌患者的eIF-4E阳性表达水平明显增高，提示非小细胞肺癌患者的eIF-4E基因表达与其年龄和肿瘤分化程度密切相关。榄香烯顺铂联合化疗后eIF-4E低表达患者的DFS和OS均明显延长。eIF-4E低表达患者榄香烯顺铂联合化疗效果较eIF-4E高表达患者明显提高，提示eIF-4E低表达患者对化疗更加敏感，因此eIF-4E的低表达是影响非小细胞肺癌化疗效果的重要因素，eIF-4E基因的高表达可能成为非小细胞肺癌治疗效果及预后不良的预测因子。榄香烯联合顺铂化疗可能通过组织有活性的eIF-4E基因的低表达抑制细胞的增长，导致致癌细胞的自我繁殖受阻，从而控制癌细胞进展及扩展eIF-4E复合物的形成，起到抑制肿瘤形成、发展和转移的目的。eIF-4E基因表达在肺癌治疗效果和预后中的作用可从分子学角度找到肺癌诊断和预后的分子指标。
综上所述，eIF-4E基因在非小细胞肺癌组织存在过表达。榄香烯联合顺铂化疗后eIF-4E低表达患者的DFS和OS均明显延长，因此eIF-4E基因的高表达可能成为非小细胞肺癌治疗效果及预后不良的预测因子。
[参考文献]
[1] 张兰兰.经纤文支气管镜冷冻治疗中、晚期肺癌致气道狭窄的护理[J].护士进修杂志，2011，26（19）：1824-1825.
[2] 赵万，胡铃敏，王铖，等.XRCC1、PARP1和APE1多态性与晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的关系[J].南京医科大学学报：自然科学版，2011，31（7）：1021-1026.
[3] 孙阳阳，曹友德，刘浩，等.shRNA沉默eIF-4E基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞VEGF-C表达的影响[J].中国肿瘤临床，2011，38（4）：200-203.
[4] 苏彤，赵立军，常文军，等.ERCC1、XPD和BRCA1基因多态与晚期非小细胞肺癌患者铂类药物化疗效果的相关性[J].第二军医大学学报，2010，31（2）：117-122.
[5] 赵美玲，杨海虹.Ⅱb/Ⅲa期非小细胞肺癌患者肿瘤RRM1蛋白的表达意义[J].重庆医科大学学报，2012，37（8）：698-702.
[6] Mathieu KB，Ali H，Fox PS，et al. Radiation dose reduction for CT lung cancer screening using ASIR and MBIR：a phantom study [J]. J Appl Clin Med Phys，2014，15（2）：4515.
[7] Yao CC，Tu YR，Jiang J，et al. β-elemene reverses the drug resistance of lung cancer A549/DDP cells via the mitochondrial apoptosis pathway [J]. Oncol Rep，2014，31（5）：2131-2138.
[8] Martineau Y，Azar R，Müller D，et al. Pancreatic tumours escape from translational control through 4E-BP1 loss [J]. Oncogene，2014，33（11）：2131-2138.
[9] 胡爱侠，孙淼淼，陈奎生，等.乳腺癌组织中mTOR、eIF-4E、4EBPS蛋白的表达及意义[J].中国妇幼保健，2012， 27（31）：4976-4979.
[10] 王晓琳.eIF-4E与肿瘤[J].中国肿瘤生物治疗杂志，2010， 17（4）：473-477.
[11] Zhao Y，Pang TY，Wang Y，et al. LMP1 stimulates the transcription of eIF-4E to promote the proliferation，migration and invasion of human nasopharyngeal carcinoma [J]. The FEBS Journal，2014，281（13）：3004-3018.
[12] Ma J，Han LZ，Liang H，et al. Celastrol inhibits the HIF-1α pathway by inhibition of mTOR/p70S6K/eIF-4Eand ERK1/2 phosphorylation in human hepatoma cells [J]. Oncology Reports，2014，32（1）：235-242.
[13] Zhou S，Wang GP，Liu C，et al. Eukaryotic initiation factor 4E （eIF-4E） and angiogenesis：prognostic markers for breast cancer [J]. BMC Cancer，2012，6（3）：231-232.
[14] 纪春梅，甄永占，范晓禹，等.赖氨大黄酸与顺铂联合对人肺癌A549细胞系增殖和凋亡的影响[J].基础医学与临床，2014，34（2）：155-159.
[15] 周蕾.榄香烯联合紫杉醇脂质体加顺铂化疗治疗非小细胞肺癌的疗效分析[J].中国肿瘤临床，2010，37（7）：411-412.
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