GS试剂制备组织切片的染色效果分析
常规病理技术常用的固定剂为 4%甲醛，脱水、透明的主要试剂为乙醇和二甲苯。已有研究中证实，常规病理技术应用中相关的试剂多具有较强的刺激性和挥发性，不但病理技术应用存在一定局限，且还会对相关人员的身体健康造成不良影响。因此，寻找一种对人体无毒、无害且安全的替代品已成为病理技术工作者的一种迫切愿望。本研究分别通过 GS 试剂和传统试剂制备组织切片，并将其分别应用在病理自动化染色的过程中，比较不同方法、不同试剂制备的组织切片的染色效果，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取湘乡市人民医院自 2013 年 5月~2015 年 2 月期间临床送检的不同活体组织病理标本共计4014 例，包括乳腺、结直肠、食管、胃、甲状腺肿物、淋巴结、皮肤、胆囊、脂肪、子宫宫颈、肝脏、扁桃体及肾穿刺组织等不同部分的新鲜病理组织，每份标本都取材 2 个组织块（组织块的大小为1.5 cm×1.0 cm×0.2 cm），并分别采用 GS 环保套液石蜡制片法和传统的石蜡制片法对组织进行处理制片（固定、脱水、透明、浸蜡），然后将其进行病理自动化染色，将采用 GS 环保套液处理的标本作为观察组，将传统试剂处理的标本作为对照组，比较两组组织标本的制片、染色效果。
1.2 方法 采用同一型号全自动脱水机、石蜡切片机、生物组织自动包埋机以及全自动染色机等。GS 环保套液由哈尔滨格林公司研究开发生产的。http://www.751com.cn
1.2.1 对照组 本组组织样本所采用的是经传统石蜡制片法制片并采用传统 HE 染色法染色方法。制片方法为：采用 4%的中性甲醛（或者 95%的乙醇和甲醛溶液以 9∶1 的比例配成固定液）对组织进行固定，经乙醇脱水（经浓度为 70%、80%、95%的乙醇和无水乙醇进行梯度脱水），二甲苯透明，浸腊后使用石蜡包埋。将其切成 4~5 μm 厚的切片。染色方法为：切片 70℃烤片 10 min;分别使用二甲苯Ⅰ和二甲苯Ⅱ脱蜡各 5 min,然后使用无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇梯度脱水各 2 min,自来水冲洗3 min;苏木精染色 8 min,自来水冲洗 3 min;1%盐酸分化液分化 7 s,自来水冲洗；蓝化液 1 min,自来水冲洗 1 min;1%伊红染色 3 min,自来水冲洗 7 s;70%乙醇、95%乙醇各 10 s;无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ各 3 min;二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各 3 min;中性树胶封固。
1.2.2 观察组 本组组织样本所采用的是经过 GS 环保染色试剂制片并采用全自动 HE 染色方法。制片方法为：采用 GS无醛固定液对组织进行固定，分别采用脱水液、透明液、浸蜡液分别进行脱水、透明和包埋，采用石蜡切片机进行切片处理。对于标本体积较小的肾穿刺标本而言，需要采用手工单独处理的方法进行制片[1],制片的步骤同上。染色方法为：切片 70℃烤片10 min;分别使用 GS 脱蜡液Ⅰ和 GS 脱蜡液Ⅱ脱蜡 5 min;然后使用无水乙醇、95%乙醇脱水各 30 s,自来水冲洗 2 min;苏木精染色 4 min,自来水冲洗 1 min;1%盐酸酒精分化 5 s,自来水冲洗 3 min;蓝化液染色 1 min,自来水冲洗 1 min;1%伊红染色2 min,自来水冲洗 10 s;除浮染液 10 s;无水乙醇 1 min;除水透明 1 min;透明 1 min;无苯封片胶封固。
1.3 统计学处理 用 SPSS.17.0 统计软件进行数据处理，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用 t 检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用 χ2检验；以 P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
4014 例患者的病理组织经 GS 环保套液制片与经传统石蜡制片法制片后，比较其组织切片可见，观察组经 GS 环保套液制片的组织切片效果更加良好，均未出现脱水不完全，组织变脆和变硬的情况；2 种方法制片后经 HE 染色，经 GS 环保套液染色的时间更短（P<0.05），且经 HE 染色后，染色更加均匀，组织细胞的结果清晰，细胞间的裂隙较少。见表 1.
3 讨论
在常规的病理技术工作中，常需要对病理组织样本进行制片染色来对其进行分析和研究，但是在脱水、固定等过程中常用的试剂，如甲醛、二甲苯等都具有十分强烈的挥发性和刺激性[2-5],不仅对实验室工作人员的身体健康会产生较大的危害，还会对环境造成很大的污染[6].因而，寻找性能稳定的能够代替甲醛、二甲苯等有害试剂的无毒、环保试剂对于病理技术工作人员和环境保护都具有十分重要的意义，GS 环保试剂应运而生。
本研究采用了哈尔滨格林公司[7]开发研制的 GS 环保试剂和传统的甲醛、二甲苯试剂对不同部位的病理组织标本进行制片和染色，结果可见 GS 试剂不仅在制片过程中具有更强的渗透性，且能够有效缩短染色过程中的脱水时间，保证组织的细胞能保持原有的结构，不会发生过度脱水而致收缩的现象；由于 GS 环保套液中的苏木精染液着色迅速，分化后冲洗时间短，也提高了染液的稳定性。在切片的时候，不论对切片的厚度要求怎样，都能发现切片中的组织染色均匀完整，且在显微镜下细胞核和细胞质的颜色分明，色泽十分亮丽鲜艳，有利于更加清晰直观的观察病理组织的细胞结构[8].
综上所述，在病理技术工作中，采用 GS 环保试剂代替传统的甲醛和二甲苯具有无毒、无污染、无异味释放的优点，染色效果更加满意，且安全性好，制片和染色时间短，值得在病理技术工作中进行推广。
参考文献：
[1] 郭效忠，苗志风，刘春荣，等。GS 环保试剂在病理制片中的应用体会[J].诊断病理学杂志，2012,7（3）：32.
[2] 寇雪梅，赵玉莹。GS 环保套液在病理技术工作中的应用[J].黑龙江医学，2012,36（9）：676-677.
[3] 田玉旺，朱红艳，苗金红，等。GS 环保试剂在病理制片技术中的应用[J].诊断病理学杂志，2011,18（4）：312-313.
[4] 宋一民，高冬玲，郝志伟。GS 环保染色套液在病理常规染色中的应用[J].诊断病理学杂志，2014,21（4）：256.
[5] 易红梅，李艳春，钟仁华，等。GS 环保型试剂在病理技术工作中的应用体会[J].临床与实验病理学杂志，2014,30（4）：463-464.
[6] 苗金红，田玉旺，朱红艳。GS 环保试剂在特殊染色中的应用[J].诊断病理学杂志，2013,20（11）：736-737.
[7] 朱卫国，刘春玲，寇雪梅，等。格林组织标本制备及切片染色套液在病理实验室中的应用[J].武警医学，2012,23（7）：610-611.
[8] 孙廷谊，谢红建，孔令非。GS 试剂在病理自动化染色中的应用[J].诊断病理学杂志，2013,20（4）：254-255.