摘要：本文对乙酰胆碱酯酶的固定化技术进行了研究。采用交联法对酶进行固定是一种广泛采用的固定化方法，本文对影响固化乙酰胆碱酯酶活性的固定化条件，诸如pH值、BSA、GA、明胶的最佳使用浓度进行了实验研究。经交联法固定的乙酰胆碱酯酶，在室温下放置2个月以后酶活性仍可保持83.15%以上。但是采用交联法对酶进行固定化过程中必须使用双功能试剂戊二醛，此试剂本身会对乙酰胆碱酯酶的活性造成较大伤害，所以经固定化以后酶的活力回收率较低。目前，一种光交联试剂聚乙烯醇苯乙烯吡啶(PvA—SbO)在酶的固定化过程中倍受青睐，本文在实验室合成出PvA—SbQ。经PvA—SbQ固定后的乙酰胆碱酯酶具有较高的活性回收率，而且在室温下放置2个月后，固化乙酰胆碱酯酶的活性仍可保持初始固化酶活性的88.64％以上。23687
毕业论文关键词：乙酰胆碱酯酶 固定化酶
Study on Immobilization Method of Acetylcholinesterase
The acetyl-cholinesterase enzyme(Ache)immobilization technology was studied．Cross-linking was a broadly used enzyme immobilization technology．In this article，the affection factors of immobilized Ache activity for example pH,the concentration of BSA,GA and gelatin were studied．The immobilized AchE by cross-linking maintained more than83.15 percent activity after being placed in room temperature for 2 months．The immobilized enzyme activity recovery by cross—linking was lower because the bi—functional reagent GA was hurtfully to AchE． Now a kind of photo-crosslinkable polymer PVA-SbQ got recognition on enzyme immobilization．A higher production technology route was explored in laboratory and the product was used to immobilize AchE．The immobilized AchE by PVA-SbQ has higher enzyme activity recovery and more than 88.64 percent activity was gotten after being placed in room temperature for2 months．
Keywords：acetylcholinesterase；immobilized enzyme
目 录
1.前言 1
1.1 酶的固定化及其意义[4] 1
1.2 酶固定化方法简介[5] 1
1.3化学法固定化酶介绍 2
1.4乙酰胆碱酯酶介绍 2
2.实验部分 4
2.1仪器与试剂 4
2.2以交联法的乙酰胆碱酯酶固定化[8] 4
2.3以PVA-SbQ法的乙酰胆碱酯酶固定化[9] 4
2.4乙酰胆碱酯酶活力的测定方法 4
2.5固定化酶活性检测 5
3.结果与讨论 6
4.结论 18
致谢 19
参考文献 19
1.前言
1.1 酶的固定化及其意义[4]
乙酰胆碱酯酶能够特异性地催化乙酰胆碱( 或丁酰胆碱) 水解为胆碱和乙酸( 或丁酸) . 利用 A ch E 的这一特性制成酶传感器, 能够对痕量有机磷农药产生线性响应, 并克服传统的气相色谱法所存在的监测速度慢、 连续性差、 分析成本高、 二次污染和无法在线监测等缺陷。 以此建立快速痕量有机磷类酶法分析方法, 可用于检测空气、 水源、 食品等环境中的有机磷化合物。
食品安全问题中，初级农产品源头污染比较严重。近年来，有机磷农药的不合理使用对环境和食品安全造成的危害已经引起了公众的担忧和关心。研究有机磷农药快速检测技术成为了研究热点。基于电化学方法的乙酰胆碱酯酶(A ch E)生物传感器因为具有操作简单、响应时间短、选择性与准确性高等优势，在食品中有机磷农药残留检测方面已有大量研究，为实现现场快速检测提供了可能由于生物传感器的灵敏度、重复性和稳定性都和酶的固定有关，所以探讨酶的固定化技术是生物传感器研究的重要环节。为了提高酶生物传感器的稳定性和灵敏度，对传统酶的固定方法改进和研究新型载体已经成为了研究热点。 乙酰胆碱酯酶的化学法固定研究:http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_16873.html