镧系镧系螯合物某些3价稀土镧系元素如铕（Eu3+）、铽（Tb3+）、铈（Ce3+）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，其中以Eu3 应用最广。Eu3螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于分辨荧光免疫测定。

经过酶反应后产生的荧光物质在.某些化合物中本身无荧光效应。一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如，4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷，受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，可发出荧光。激发光波长为360nm，发射光波长为450nm。

异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，呈现明亮的黄绿色荧光。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。由于人眼对黄绿色较为敏感，因此通常运用在切片标本中。

藻红蛋白（P-phycoerythrin，PE）是在红藻中所发现的一种可进行光合作用的自然荧光色素，分子量为240kD的蛋白，最大吸收峰为564 nm，当使用488 nm激光激发时其发射荧光峰值约为576 nm，对于单激光器的流式细胞仪来说，推荐使用585±21nm的带通滤光片，双激光器的流式细胞仪推荐使用575±13nm的带通滤光片。FL2探测器检测PE。

碘化丙啶（ propidium iodide，PI）可选择性地嵌入核酸（DNA、RNA）的双螺旋碱基对中。在对DNA染色时，需用RNase对细胞进行处理，以排除RNA对DNA荧光定量精度的影响。在488nm波长激发下，PI的发射光谱为610-620nm。 FL2探测器检测PI。

在生物学上运用生物体内荧光物质的主要有几大类，分别为虫荧光素&细菌荧光素&腰鞭毛虫荧光素&腔肠动物荧光素，每种荧光素分别存在于不同种类生物体内，目前对萤火虫生物发光体系的研究最多，也最为成熟。

1.4荧光素的主要用途

    1.吸附指示剂：

氧化还原指示剂。荧光光度分析硫离子,滴定氯、溴和碘。荧光素是发光物质的基质，使许多生物具有荧光的物质。它与ATP形成复合物(荧光素腺苷)，然后再与荧光酶(1uciferase)结合。氧化过程中激活的荧光素发光。整个反应用作活的生物的检出或对很低程度的细菌污染作定量分析，例如：用荧光光度计计量。

2.用作荧光吸附指示剂：

用于沉淀滴定测定Cl- 、Br-、 I-及SCN-银盐。还用作酸碱滴定荧光指示剂，PH值4.0（蓝绿色）~6.6（绿色）。

3.用作化学分析的指示剂、生物染色剂和化妆品着色剂。

1.5荧光素的结构及其特性

荧光素及其衍生物是重要的荧光探针材料。化学名称为3,6-二羟基螺[异苯并呋喃-1(3H),9,-(9H)-咕吨-3-酮]或9-(邻羧苯基)-6-羟基-3H-咕吨-3-酮。由于氧桥键把两个苯环固定在一个.平面上，使分子具有刚性共平面结构。荧光素在激发光的作用下能产生强烈的荧光 。源:自*751~·论,文'网·www.751com.cn/

荧光素具有高的消光系数。激发和发射波长都在可见光区，在水中具有较高的荧光量子产率。自1871年Bayer首次合成出荧光素至今一百多年的时间内，.荧光素广泛的应用在蛋白质的结构特性研究中。但其所具有的特定属性也限制了它在许多研究领域中的进一步应用：

(1)较小的Stoke位移，使得样品背景对荧光的干扰相对较大；

(2)荧光量子产率对pH值敏感，在生物体内的生理环境下荧光量子产率降低 ；

(3)具有对光敏感的基团，在强光检测下容易分解 ；  6-羧基荧光标记亚磷酰胺化合物的合成(3):http://www.751com.cn/huaxue/lunwen_68203.html