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群体感应自杀种群在富营养培养基中的生长模型(4)

时间:2018-04-02 16:09来源:毕业论文
仪器设备 试管、24孔板、96孔板、移液管(5mL、10mL)、移液枪(20L、100L、1000L)、三角瓶(500 ml 、250ml、100ml)、烧杯、量筒、玻璃棒、锥形瓶、精密pH计、灭



仪器设备
试管、24孔板、96孔板、移液管(5mL、10mL)、移液枪(20μL、100μL、1000μL)、三角瓶(500 ml 、250ml、100ml)、烧杯、量筒、玻璃棒、锥形瓶、精密pH计、灭菌锅、煤气灯、二氧化碳培养箱、恒温摇床、生物安全柜、低温保存箱。
2.2    拟采取的方法
扩菌:取5毫升LB液体培养基放入试管,接种一个单菌落,将试管放入37℃、200rpm的恒温摇床中过夜培养16小时。
接种:菌液以1:1000的比例接种到液体培养基中。
CFU:取20ul加入180μL无菌水中进行一定梯度的稀释,然后取10μL菌液加入已倒好LB固体培养基的24孔板中,轻微地摇晃均匀。放入37℃培养箱中静置培养,半小时后倒置。培养20小时左右拿出计数。
2.3    拟定的实验方案
9mL体系,LB液体培养基,接种野生型top10F',三个pH(5.7、6.5、7.4),四个IPTG浓度(0、0.05、0.1、1mM),30℃、240rpm培养35h,期间取样14次,测CFU。
取12支试管并编号1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12(其中1、5、9号管为对照),按表2.1所示加样。
表2.1 加样表
管号    1    2    3    4    5    6    7    8    9    10    11    12
LB(mL)    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9
pH    5.7    5.7    5.7    5.7    6.5    6.5    6.5    6.5    7.4    7.4    7.4    7.4
IPTG(μL)    0    4.5    9    90    0    4.5    9    90    0    4.5    9    90
菌液(μL)    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9    9
A.比较在不同pH值的培养基中的生长现象
分别配制pH5.7,pH 6.5,pH7.4 的液体培养基与固体培养基。
培养基按表2.2和表2.3所示配方配好后,放入121℃灭菌锅中灭菌20分钟,拿出后冷却至50℃左右(用手摸着不烫),按稀释一千倍的比例加入卡那霉素,摇匀备用。LB固体培养基加好卡那霉素后倒入24孔板中,凝固后倒置备用。
培养基的pH值用pH计测量。pH计的使用方法为:预先将厂家附赠的试剂粉末配置好pH6.86和pH4.13的溶液,测量当下液体温度并在pH计上显示的温度调整到当下温度,将测定模式切换到pH测量,将电极棒浸入pH为6.86的溶液中轻轻搅动,待数值稳定后将定位数值调到6.86后用蒸馏水冲洗电极棒,然后将电极棒浸入pH为4.13的溶液中轻轻搅动至数值稳定后将斜率的数值调到4.13,然后就可以测定培养基的pH值了。可使用盐酸和氢氧化钠调节pH值 群体感应自杀种群在富营养培养基中的生长模型(4):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_12262.html
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