的距离超过 10 米。取样完成后用硅胶干燥叶片样品进行保存。采样详细情况见
表1。 表 1土荆芥野外采样点位置和生长环境描述
Table1 The details about the location and habits of Chenopodium ambrosioides L.
Province  Location  Sampling  Habitat description
pollution
situation  
Latitude  Longitude  Height（m）
广西
NN  南宁市  公路旁边  无污染  22.820    108.320    95
GP  桂平木圭镇  露天锰矿区  锰污染  23.242    101.821    103
 云南
YS  砚山  废弃铅锌矿  铅锌污染  23.548    104.244    1685
JJ  鸡街  多金属冶炼厂  铅锌污染  23.506    103.239    1539
DN  斗南  露天锰矿区  锰污染  23.598    103.690    1711
GJ  个旧  市区路边  铅锌污染  23.362    103.140    1548
MY  建水县  铅锌矿区  铅锌污染  23.996    103.030    1511
XC  新城  新城锰矿区  锰污染  23.809    102.456    1292
KM  昆明  郊区路边  无污染  24.824    102.823    1955
LJ  丽江  郊区路边  无污染  26.865    100.193    2395
YL  彝良县  铅锌矿区  铅锌污染  26.514    103.994    897
湖南
JS  吉首  冶炼厂周围  锰污染  28.298    109.751    220
HY  花垣县  冶炼厂周围  锰污染  28.577    109.490    310
XT  湘潭  冶炼厂周围  锰污染  27.960    112.851    57
CS  长沙  荒地四周  无污染  28.201    112.838    42
江苏  YX  宜兴  砺山河旁边  无污染  31.878    118.754    34
四川  HL  会理县  大梁子铅锌矿附近  铅锌污染  26.551    102.162    1802
贵州  JN  望谟郊纳镇  公路旁边  无污染  25.290    106.320    668
 
1.2土荆芥 DNA的提取
对 18个种群的土荆芥叶片提取DNA。
准备材料：聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、β-巯基乙醇、氯仿、异丙醇、乙醇
（1）将100-500 mg硅胶干燥的叶片置于 2 ml 离心管中，加入少量 PVP 和
钢珠
（2）研磨机65 HZ研磨150 s
（3）每个样品中加入 1000 μl Plant DNAzol 和2 μlβ-巯基乙醇，混匀。65 ℃
水浴1 h，每隔5 min 上下颠倒
（4）吸取900 μl 裂解产物到2 ml 离心管，加入 900 μl 氯仿，上下缓慢颠倒
混合均匀。12000 rpm 离心5 min
（5）转移上清液至 1.5 ml 离心管，加入 0.7 体积异丙醇（-20 ℃预冷）混
匀。12000 rpm 离心 10 min，弃上清液
（6）加入800 μl 75%乙醇，吹打数次，弃液体。再加入 500 μl 95%乙醇，
吹打并弃液体，并在室温中直至离心管中乙醇挥发完
（7）加入100-200 μl TE缓冲液或无菌水，4 ℃保存DNA样品
1.3土荆芥 SSR 位点的鉴定与 SSR 引物的设计
使用 Illumina测序平台构建土荆芥基因组 DNA文库。然后为了鉴定以及开发
SSR，所有序列与核苷酸（Nt）收集数据库中的高度相似的序列（megablast）对 土荆芥微卫星引物开发+文献综述(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_19705.html