1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
1.1.1 试剂:
胰蛋白胨 Tryptone 购于 OXOID 公司
酵母提取物 Yeast Extract 购于 OXOID 公司
琼脂粉 Agar 购于 DSBIO 公司
1.1.2 试剂的配置:
(1)PBS 缓冲液:NaCl 8g,KCl 0.2g,NaHPO4•12H2O 3.63g,KH2PO4 0.24g,加 H2O 至 1000ml,pH7.4 ,121℃ 20min 高压灭菌
(2)液体 LB 培养基:胰蛋白胨 10g,酵母提取物 5g,氯化钠 10g,加 H2O 至 1000ml,pH7.4 ,121℃ 20min 高压灭菌
(3)固体 LB 培养基:每 1000ml 液体 LB 培养基加入 15g 琼脂粉,121℃ 20min 高压灭菌
(4)半固体 LB 培养基:每 1000ml 液体 LB 培养基加入 7.5g 琼脂粉,121℃ 20min 高压灭菌
(5)SM 液:NaCl 5.8g,MgSO4•7H2O 2g,1M Tris.Cl(pH7.5)50ml,2%明胶溶液(m/V)5ml,加 H2O 至 1000ml,121℃ 20min 高压灭菌
1.1.3 耗材:
0.22μm针头式过滤器 Millipore公司
20ml一次性使用配药用注射器 常州金龙医用塑料器械有限公司
1.1.4 仪器:
台式高速冷冻离心机 Kendro公司
涡旋振荡器 Scientific Industries
台式恒温振荡器 Crystal 公司
生物洁净工作台 苏州安泰空气技术有限公司
高温灭菌器 KAGOSHIMA SEISAKUSYO LSC
隔水式电热恒温培养箱 上海市跃进医疗器械一厂
微量紫外分光光度 Thermo
电子天平 赛多利斯科学仪器(北京)有限公司
1.2 试验方法
1.2.1 采样和处理
猪场情况:安徽宝迪种猪场:规模约5000头基础母猪;品系为美系杜长二元猪;厂区虽然设备较旧,但卫生条件及生产管理较好。
采样:本试验选取断奶前和断奶后的仔猪为研究对象,选择安徽一猪场共10窝健康仔猪,每窝选取3只健康仔猪,采集5窝仔猪断奶前2天的粪样及5窝仔猪断奶后每天粪样(持续一周),混合其粪便,共10份样品,记录粪样的状态。
处理:取1g粪样与20ml PBS缓冲液混匀并握旋,5000 r/min离心10min,去掉固体,取上清液,再12000 r/min离心20min,取上清液。最后用0.22μm微孔滤膜过滤后待用。 安徽一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_19728.html