1.3.4  样品的酸不溶灰分测定
采用《中国药典》中灰分测定法[20]：向总灰分实验中剩余的灰分中加入盐酸，80℃水浴加热10min，用热水冲洗坩埚及盖子，用无灰滤纸过滤滤液及剩余灰分，多次洗涤坩埚、滤纸及残渣，将残渣连同滤纸移回原坩埚中，在电炉上灼烧至灰分完全消失，冷却，称重直至衡重，记录质量m4，按照下式计算。酸不溶性灰分=（m4- m1）/（m2- m1）×100%。（m1为坩埚质量，m2为坩埚和样品质量，m4为试验后坩埚和样品的质量）。
1.3.5  样品的蛋白质含量测定
使用Foss 蛋白质测定仪（瑞典）进行蛋白含量测定[21]：将样品、浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，碳分解为CO2,、氢分解为H2O逸出，而有机氮转化为NH4与浓硫酸结合生成(NH3)2SO4。加碱蒸馏使氨蒸出，用硼酸吸收后以标准HCl或H2SO4滴定，计算出总氮量，再乘F值算出蛋白质含量。
1.3.6  样品的脂肪含量测定
采用索氏抽提法[22]：称取适量干燥蚂蟥样品粉末，质量记为m0，装入脂肪包中，记录重量记为m1，将样品放入索氏提取器中，用适量石油醚（或乙醚）浸泡，利用索氏提取器连续浸提10h，将脂肪包取出，待溶剂挥发完之后，称量质保及样品质量记为m2。样品中脂肪含量=（m1- m2）/ m0。
1.3.7  样品的总糖测定
采用3,5-二硝基水杨酸比色法[22]：称取样品于三角瓶中，向样品中加入盐酸，混匀，沸水浴准确计时；向完全水解的样品中缓慢加入氢氧化钠，及时搅拌防止产生大量热量，调节pH至中性；将样品抽滤；收集滤液于容量瓶中，定容。配制浓度为1g/L的蔗糖溶液作为蔗糖标准液。
测量标准曲线。每个样品分别编号，每个样品重复测量三次。按照梯度分别向试管中加入标准液，样品试管中不加入标准液，向样品试管中分别加入一定量样品液；再向试管中加入相应体积蒸馏水，让待测液体体积达到一定体积；分别向试管中加入DNS溶液，将试管中溶液混匀，沸水浴5min，冷却至室温后加入蒸馏水定容，颠倒混匀。空白试管做对照，测量λ=540nm处吸光光度，记录数值。 蚂蟥冬眠过程中糖蛋白质脂肪代谢和内在品质的研究(3):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_21930.html