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水稻响应赤霉素的小RNA鉴定与分析(4)

时间:2018-10-06 13:54来源:毕业论文
7) 取出胶后,根据Maker判断并切取10-30nt的小分子RNA,用枪头研碎胶块,在200L左右的NaCl溶液(氯化钠水溶液,0.3mol/L)中浸泡过夜 8) 向体系中加入1/10体积的


7)    取出胶后,根据Maker判断并切取10-30nt的小分子RNA,用枪头研碎胶块,在200μL左右的NaCl溶液(氯化钠水溶液,0.3mol/L)中浸泡过夜
8)    向体系中加入1/10体积的NaAc(醋酸钠,3mol/L)、2μL glycogen(糖原,10mg/ml)和2.5倍体积的无水乙醇(在-20℃预冷过),放置在-80℃冰箱沉淀过夜,取出后14000rpm  4℃离心1h,后弃上清液
9)    在沉淀中加入1ml的75%乙醇轻轻洗涤沉淀,风干后加入RNAase-free H2O溶解沉淀物,完成small RNA的胶回收

1.2.4  Small RNA的cDNA文库构建与测序   
在纯化的small RNA片段上连上5’和3’接头,反转录合成第一条cDNA后跑15-20个PCR循环,完成文库构建。Solexa测序由华大基因公司完成。 水稻响应赤霉素的小RNA鉴定与分析(4):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_23701.html
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