利用酵母双杂交技术筛选NLR1-V的互作蛋白

摘要：小麦白粉病是由专性寄生真菌小麦白粉病菌引起的病害，目前对白粉病抗病性强，抗谱范围广的基因Pm21已被本实验室定位到染色体6VS的FL:0.45-FL:0.58区段，在该区段加密遗传标记缩短了Pm21所在的区间，并在该区段克隆获得一个CC-NBS-LRR类的抗病基因NLR1-V，但是该候选基因在小麦的抗白粉病通路中如何发挥作用，如何通过蛋白质间相互作用发挥抗病机制目前尚不明确，本研究利用酵母双杂交系统技术在实验室前人研究的基础上，对定位于Pm21基因座的CC-NBS-LRR类抗白粉病候选基因NLR1-V的蛋白在小麦抗白粉病通路中与哪些基因蛋白有互作进行研究，构建诱饵载体和三框cDNA文库，通过三轮筛选得到35个可能互作的基因片段，分析蛋白类型和结构为之后NLR1-V基因介导的抗白粉病分子机制奠定基础、提供依据。31408
毕业论文关键词：小麦白粉病；CC-NBS-LRR类抗病基因;蛋白质互作；酵母双杂交系统；候选蛋白筛选
Using the yeast two hybrid technology screening disease-resistant gene protein interactions
Abstract： Wheat is an important crop in world, it is one of the most widely planting food crops, wheat have a large number of production and consumption in China every year, but in wheat production process, there are some factors such as natural or unnatural will bring stress to the wheat growth, such as the wheat powdery mildew, caused by the obligate parasites fungus, the Pm21 is strong for powdery mildew resistance and resistance spectrum of a wide range of resistance genes, The gene is positioning in the FL:0.45-FL:0.58 of the chromosome 6VS by our laboratory, and in the section of encryption genetic markers to shorten the Pm21 in the interval, in the section for cloning a CC - NBS LRR class candidate resistance genes, but this candidate genes how to play a role in wheat powdery mildew resistance pathway, how to use protein interactions play a disease-resistant mechanism is not clear, this research use yeast two hybrid system technology in the laboratory, on the basis of predecessors' research, to study the CC - NBS LRR - class candidate powdery mildew resistance gene and protein how to interactions and work in wheat powdery mildew resistance pathways, with the study for laying a foundation for the gene mediated disease resistance molecular mechanism and provides the basis.
Key words: Wheat powdery mildew; cc-NBS-LRR; Protein interactions; the yeast two hybrid technology
目录

摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
技术路线3
1材料与方法3
1.1材料 3
1.1.1酵母AH109菌株3
1.1.2载体3
1.1.3酵母双杂文库4
1.1.4缺陷培养基4
1.1.5 Carrier DNA（鲑鱼精）4
1.1.6 X-α-Gal4
1.2方法（技术路线）4
1.2.1诱饵载体和酵母双杂文库的构建 4
1.2.2小规模转化酵母菌AH109(单转)5
1.2.3诱饵蛋白自激活报告蛋白基因检测5
1.2.4文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母（双转）5
1.2.5四缺培养基蓝白斑筛选5
1.2.6 CC结构域筛库测序比对分析结果5
2结果与分析6
2.1 诱饵载体和库质粒的构建6
2.1.1诱饵载体的构建 6
2.1.2酵母双杂文库的构建 6
2.2小规模转化酵母菌AH109(单转)以及自激活验证7
2.3文库质粒大规模转化已携带钓饵质粒的酵母（双转）8
2.4四缺培养基蓝白斑筛选8
2.5四缺培养基上蓝色候选菌落菌液PCR扩增测序8
2.6 CC结构域测序比对分析结果8
3讨论9
致谢10
参考文献10
利用酵母双杂交技术筛选NLR1-V的互作蛋白
引言：小麦，全球种植最为广泛的农作物之一，为世界性重要粮食作物，人们喜爱的食物如面条、面包、吐司等食物都是由小麦面粉加工而成。生育期长是小麦重要的特征之一，由于生育期长，小麦自播种至收获整个过程中受到各种生物及非生物逆境胁迫的可能性就会加大，其中小麦白粉病是由专性寄生的白粉真菌引起的一类主要病害，小麦受白粉菌侵染后植株营养供应白粉菌生长，正常生长时的养分被掠夺，光合作用效率下降，光合产物积累不足植物生长发育就会减缓进而影响一系列生理反应，最终造成植物分蘖减少、幼苗死亡，使穗数、穗粒数、千粒重下降，最终大幅度减[1]。对于小麦的白粉病的防治任重道远，可以通过一些合理的栽培措施或者喷施药剂等方法进行防治，然而最经济有效的防治方法是种植抗病品种，抗病品种中由于抗病基因发挥作用而使作物抗病，著名的“基因对基因”这一假说就阐述了植物抗病基因与病原物无毒基因互作时植物发生过敏性反应的原理[2]，即在病原物的侵入点进行定位快速死亡[3]，也就是让植物具有了对病原物产生了抗性[1, 4, 5]，但是由于白粉菌生理小种会不断发生变异，这些变异可能会导致已有抗性基因不起作用，品种抗性的丧失，所以不断的发掘新的抗性基因，选育抗性强，范围广的抗白粉病品种则显得尤为重要与迫切。利用酵母双杂交技术筛选NLR1-V的互作蛋白:http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_27557.html