摘要：褪黑素（melatonin）作为一种保守的吲哚类物质，在动物、植物和微生物中都起着重要的生理调节作用，但是目前还不清楚褪黑素植物生理作用的具体作用机制。针对上述问题，本实验以油菜（Brassica napus）为实验材料，通过定量PCR技术检测了褪黑素对盐胁迫相关基因转录水平的影响；为了进一步了解褪黑素的生理作用与mircoRNA之间的联系，对植物盐胁迫相关的mircoRNA也进行了检测，并尝试采用生物信息学方法预测受褪黑素影响的mircoRNA在耐盐机理中的作用。实验结果1）发现了褪黑素影响与盐胁迫相关的氧化还原酶、转运蛋白和胚胎晚期丰富蛋白等基因的转录水平；2）证实了与褪黑素有关的miR159和miR169a两个mircoRNA；3）预测了mircoRNA的与盐胁迫相关的一些靶基因。36604
毕业论文关键词：褪黑素；油菜；mircoRNA；盐胁迫
Changes of salt-related genes and mircoRNA in response to melatonin in Brassica napus
Abstract: Melatonin as a conservative Indole derivative plays an important physiological role in animals, plants and microbes, but the mechanism of melatonin is still unclear. In this study, Brassica napus was used as experimental material. The effects of melatonin on the transcriptional level of salt stress related genes were detected by qPCR technique. In order to further understand the relationship between melatonin and mircoRNA .The mircoRNAs related to plant salt stress were also tested and bioinformatics method was used to predict the effect of melatonin related mircoRNA in plant salt tolerance. Results 1) found that melatonin affected the transcription level of oxidoreductases, transporters and Late Embryogenesis Abundant associated with salt stress; 2) confirmed miR159 and miR169a associated with melatonin; 3) predicted Some of the target genes associated with salt stress for mircoRNAs.
Key words:  melatonin; Brassica napus; mircoRNA; salt stress
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1. 材料与方法2
1.1. 实验材料2
1.2. 褪黑素浓度的筛选3
1.3. 褪黑素对盐胁迫相关基因的影响的检测3
1.4. 测定褪黑素对MircoRNA的影响3
2. 实验结果4
3. 讨论11
3.1. 褪黑素影响氧化还原酶系统影响油菜抗盐胁迫11
3.2. 褪黑素上调盐胁迫下胚胎晚期丰富蛋白11
3.3. 钠氢逆转运蛋白转录水平在褪黑素处理下发生了下调12
3.4. 褪黑素参与了脱落酸介导的油菜抗盐过程12
3.5. 褪黑素影响mircoRNA介导的油菜抗盐过程12
致谢13
参考文献13
附录15
褪黑素对油菜幼苗盐胁迫相关基因及mircoRNA表达的影响
引言：高盐胁迫是植物所常受到的非生物胁迫中的一种。我国大部分农业用地处于半湿润，半干旱以及干旱地区，是土地盐碱化受害最严重的国家之一。受盐碱化影响的农业用地面积已经占到全体农业用地的近百分之五[1]。开发新型的耐盐作物这一工作需要对植物耐盐胁迫背后的机制有详细的了解。最近数十年以来，褪黑素对植物生理的重要作用被不断的揭示出来，本文意在了解褪黑素在植物抗旱过程中所发挥的作用。
McCord等在1917年发现牛的松果体提取物可以收缩两栖类无尾目幼体表皮中的色素细胞，从而使得蝌蚪表皮的颜色变浅，这也是褪黑素名字的由来[2]。1960年在牛的松果体中提纯了褪黑素（N-乙酰基-5-甲氧基色胺），15年后发现了褪黑素与人类昼夜节律之间的联系[3]。1995年Dubbels等在包括烟草，香蕉，黄瓜，土豆，甜菜等多种植物中，通过高效液相色谱，发现了褪黑素的存在[4]。与动物相类似的是，褪黑素在植物中也作为昼夜节律和与光周期的一个调控因子。在红叶藜（Chenopodium rubrum）中，在12/12小时光照循环中，褪黑素含量呈现周期性变化。在光照下褪黑素含量很低，而在黑暗中褪黑素含量明显上升，这与动物的昼夜节律调节有着一定的相似性[5]。同时，褪黑素还可能存在植物生长调节剂样的效应。由于褪黑素与生长素，IAA，3-吲哚乙酸之间存在着化学结构上的相似性，其都为色氨酸衍生物，都包含一个吲哚环。因此，褪黑素可能有着与生长素类似的功能，而这一点，已经在白羽扇豆（Lupinus albus）中得到了验证[6]。对于其他的植物激素，褪黑素可以促进提高赤霉素水平从而打破盐胁迫下对黄瓜种子萌发的抑制作用[7]。褪黑素还会上调细胞色素P450单加氧酶从而促进脱落酸的分解降低脱落酸的含量[8]。褪黑素还被发现会在白羽扇豆中抑制1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶（ACC oxidase），生物体中乙烯合成的关键酶的活性。从而下调乙烯水平[9]。这些反应都应该是属于褪黑素作用途径中的下游反应。 褪黑素对油菜幼苗盐胁迫相关基因及mircoRNA表达的影响:http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_35123.html