摘要：开花是植物从营养生长到生殖生长的一个重要转折点。开花途径启动对生殖生长的成功至关重要。在拟南芥中已发现了开花关键因子——成花素FLOWERING LOCUS T（FT），它与下游的bZIP转录因子FLOWERING LOCUS D（FD），在顶端分生组织（SAM）中合成复合物来调控开花过程。在马铃薯中，虽然目前对其开花过程研究的非常少，但是这方面的研究对马铃薯育种是非常重要的。目前研究已获得马铃薯开花途径中的FT蛋白SP3D，其下游信号未知。那么它是否也是通过FD来传递的呢？为了解析这个问题，本实验通过同源比对，获得马铃薯中潜在的FD基因序列，对其进行基因和转录水平的克隆及并进行组织特异性和生物信息分析。序列分析表明，该基因含有684bp的开放阅读框，编码227个氨基酸，含有bZIP保守序列，蛋白分子量为24 kD左右，理论等电点为9.71，为非分泌性蛋白，在检测的各组织中表达量非常低，仅叶片中有少量表达。这些信息都为进一步研究FD在马铃薯开花途径中的功能打下了理论基础。37298
毕业论文关键词：马铃薯；FD基因；开花途径
Molecular cloning and primary function analysis of potato StFD2
Abstract：Flowering is an important turning point from vegetative growth to generative growth. The initial of floral pathway is vital to the success of generative growth. In model plant Arabidopsis thaliana, an important florigen protein FLOWERING LOCUS T (FT) interacted with a downstream bZIP protein FLOWERING LOCUS D (FD) and coregulated flowering process in SAM. In potato, the studies of flowering are rare, but it is very vital for sexual breeding. For now, the FT protein SP3D was cloned, but whether it functions with FD on flowering is still elusive. In our studies, we got the FD candidate gene StFD2 through homologous alignment, then we cloned the sequence using genomic DNA and cDNA from different tissues and did the bioinformatic analysis. All these results showed that StFD2 gene has a 684bp-long ORF coding 227 amino acids, and the molecular weight is around 24 kD and pl is 9.71. StFD2, as a non-secreted protein, contained a bZIP domain. PCR assay showed its expression is very low in all tested tissues, and only can be detected in leaves. All these information offers theoretical base to further research of its function in flowering.
Key words: Solanum tuberosum L；FD；floral pathway
目 录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 3
1．1 材料 3
1．1．1 植物材料 3
1．1．2 菌株和载体 4
1．1．3 酶与化学试剂 4
1．2 方法 4
1．2．1 基因组DNA和总RNA的提取 4
1．2．2 StFD2序列的扩增 4
1．2．3 DNA片段测序 4
1．2．4 cDNA第一链的逆转录合成 4
1．2．5 组织特异性分析 4
1．2．6 生物信息学分析 5
2 结果与分析 5
2．1 StFD2基因的获得与克隆 5
2．1．1 序列的比对获得 5
2．1．2 基因组片段电泳结果 5
2．1．3 基因组PCR胶回收测序结果（见附录A） 6
2．1．4 NCBI序列比对 6
2．1．5 组织特异性分析 6
2．2 生物信息学分析 6
2．2．1 从Spud DB网站下载得到基因CDS序列（见附录B） 6
2．2．2 蛋白质结构与定位分析 6 马铃薯StFD2基因的克隆及初步功能分析:http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_36032.html