(4）测定步骤
取样品约500mL，加入浓硝酸酸化至pH值1左右。当样品中悬浮物较多时，需用中速定量滤纸过滤，滤液贮于聚乙烯塑料瓶中。移取同标准溶液2 0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL放置50mL容量瓶中，用（1:499）硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，此标准系列含铜的浓度为0.0mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、3.0 mg/L、4.0 mg/L。放在仪器最佳工作条件下，于波长324.7nm处，以空白调零，测定其吸光度。以测定的吸光度为纵坐标，相对应的铜含量mg/L为横坐标，绘制出工作曲线。
(5）测定
用移液管移取式样溶液25.0mL，放置于50mL容量瓶中，用（1:499）硝酸溶液稀释至刻度，摇匀。按工作曲线的绘制中同等的仪器条件，以空白调零，测定其吸光度，从工作曲线中查出相对应的铜含量mg/L。

2.3 实验方法
2.3.1 菌种来源及准备
2.3.1.1菌种的来源
本实验选用的菌种为实验室保存的氧化亚铁硫杆菌。并通过多次接种于转接，使菌种在9K培养基中培养，使其活性得到恢复。
2.3.1.2菌种的准备（驯化）
取一250mL三角瓶，加入85mL去离子水，放入蒸汽灭菌器中灭菌20min，灭菌后静置至温度达到室温，取10g磨好的矿石样品，放入烘箱中200℃，灭菌2h，静置至室温后，放入三角瓶中，称取22gFeSO4•7H2O于紫外灯下灭菌2 h，放入三角瓶中，量取5mL菌种，加入三角瓶中，并调节pH值至2.0。放入30℃，220r/min的摇床培养箱中培养，定期用5mol/L的浓硫酸调节pH值，使其稳定在2.0，经过20天的驯化培养，菌种数目达到105/mL数量级，保存备用。
2.3.2 矿样来源及准备
2.3.2.1矿样的来源
实验选用矿山开采遗留的废石作为实验矿样，具有含铜品位低、碱性脉石含量高的特点，符合我国铜矿含量的特性。考虑到矿物的赋存状态且在各个粒度级别分布不均匀性的情况，实验中各粒度包括了该粒度一下的所有级别。
2.3.2.2矿样的预处理
取一定量的矿山开采遗留的废石，一次取一定量的矿样放入研钵中研磨，由于矿石硬度较大，无法采用搅拌机研磨。将磨好的矿石放入筛子中筛分，取20目、60目、100目、180目的筛子，将筛好的矿样粉末，放入5个不同的三角瓶中并进行标记，依此重复操作直到各个粒度的矿样粉末量达到要求，保存待用。
2.3.3 矿浆溶液
实验选用配置好的9K培养基。
2.3.4 单因素实验
分别测定pH值、接种量、矿浆浓度以及矿石粒度这五个因素的最适水平，对每个因素分别选取5个水平：（接种量2.5%、5%、7.5%、10%、12.5%； pH值1、1.5、2、2.5、3；矿浆浓度5%、10%、15%、20%、25%；矿石粒度<0.1mm、<0.2mm、<0.4mm、<0.7mm<0.9mm），在对某个因素进行单因素分析的过程中，其他因素为一相同水平。按下表进行实验。
表2.4 单因素实验数据
项目            水平水平        
pH
矿浆浓度    1
2.5%    1.5
5.0%    2
7.5%    2.5
10%    3
12.5%
接种量    2.5%    5%    7.5%    10%    12.5%
矿石粒度    <0.02mm    <0.03mm    <0.05mm    <0.1mm    <0.9mm
2.3.4.1 pH
首先向5个三角瓶中加入一定量的矿样（<0.1mm），随后加入蒸馏水调节矿浆浓度为10%。接下来用5mol/L的硫酸分别调节pH值至1.0、1.5、2.0、2.5、3.0，接种嗜酸性氧化亚铁硫杆菌，接种量为5%。将三角瓶放入温度为30℃的恒温摇床培养箱中培养，接下来不定期的取样，并测定pH值，用5mol/L的硫酸调节pH值使之分别稳定在1.0、1.5、2.0、2.5、3.0，同时采用血球计数法计算菌体数目，直至培养基菌体数目文持稳定，实验过程中定期，取样采用重铬酸钾滴定法测定浸矿过程亚铁氧化率，以菌体数目衡量嗜酸性氧化亚铁硫杆菌生长状况，用原子吸收光谱法测得铜离子浸出量。 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌浸矿工艺研究(5):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_3838.html