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苦参提取液对小麦条锈病菌的抑菌作用(2)

时间:2019-09-24 12:58来源:毕业论文
对于小麦条锈病的发生起着决定性作用的是条形柄锈菌菌源与菌量。小麦条形柄锈菌一般发生叶片、叶鞘茎秆,还有就是穗部。初期小麦叶片的发病特征:


对于小麦条锈病的发生起着决定性作用的是条形柄锈菌菌源与菌量。小麦条形柄锈菌一般发生叶片、叶鞘茎秆,还有就是穗部。初期小麦叶片的发病特征:首先可以观察到褪绿斑,下一步出现黄色夏孢子堆形状呈长椭圆形,最后产生黑色的孢状冬孢子堆[8] 。小麦在抽穗、灌浆期最容易发生条锈病感染且发病较重,在小麦杨花到灌浆这个时期,小麦的千粒重及产量损失率与条锈病的病情指数有显著相关性的是,在试验测定中可以作为衡量的指标之一[11]。
随着环境的不断变化我们发现,小麦条锈病菌种类也在不断更新,使得生产中危害呈现越来越严重的态势,现在就有新的生理小种和致病类型。当前在小麦生产中最主要的防治措施是使用化学类药剂,这些化学药剂对小麦条锈病一般都具有良好的防效、促进增产作用[2]。但是,随着大量化学药剂的频繁使用,病菌已明显具有相当强抗药能力,尤为严重的是污染生活环境,比如:土壤与水中有相当的农药残留,从而不能长期使用。不然,不仅达不到预期的防治效果,而且会对人们的身体健康与生活环境构成严重威胁。鉴于对防治小麦条锈病越来越需要,寻找和开发新的无环境污染效果好的“绿色农药”尤为受到重视。基于对小麦病害防治的需要,本实验研究了苦参提取液对小麦条锈病菌活性的抗性作用,希望开发出更符合环境的试剂从而应用于大田生产[1]。
1.材料与方法
1.1试验时间及地点
    试验于2015年3月10日开始,在周口师范学院生命科学与农学学实验室进行,分为室内饱子萌发试验和小麦幼苗试验,供试小麦品种为易感条锈病品种,本实验于2015年5月20日结束。
1.2材料
    苦参;试验对照试剂为25%百里通化学药剂;小麦条锈菌菌种为从周口农科院试验田小麦病株采取的混合菌种,在学院实验室中分离纯化所得;小麦种子;配置PDA培养基的药品;其他试剂均为分析纯。以上实验材料均有周口师范学院生命科学与农学学院提供。
    试验仪器:超净工作台;生化培养箱;全自动高压灭菌锅;电子天平
1.3试验方法
1.3.1苦参提取液的制备[1] 
    称取苦参100g研磨成粉后加水煮沸1.5h,过滤后留得药液。把过滤后的药液反复沉淀3次,收集药液。然后进行离心:3 000r/min,5min,得上清液。最后把药液减压浓缩至50mL左右,倒在锥形瓶中,于40C冰箱冷藏备用。
1.3.2室内孢子萌发试验
    在试验田中收集患病的小麦叶片,清洗干净后用灭菌的剪刀将收集好患病叶片剪成小块放入盛有用95% 乙醇溶液的烧杯中浸泡10min后取出。然后再用无菌水浸泡20min,把倒掉无菌水后的烧杯放入超净工作台备用。打开紫外线和超净工作台上的通气口30min后正式操作试验。首先将灭菌的PDA培养基加热融化,倒入灭菌的培养皿中。然后用移液管将浸泡病叶所得溶液吸入并且滴入培养皿内,再把培养皿放入恒温光照培养箱中培养,最后挑出好的孢子纯化菌种,培养备用[3]。
    首先取751个灭菌的培养皿,直径为6cm,把它们编号为:0、1、2、3、4、6,然后将PDA培养基融化后分别倒入这751个培养皿中,再把苦参药液制备成浓度为0、3、6、9、12、15mg/mL的溶液分别倒入编号的培养基内与PDA充分混匀。在培养基中培养备用的纯化新鲜菌种,用毛笔轻轻将条锈病菌孢子均匀地扫于这751个培养皿中的培养基上,然后放回恒温培养箱中持续培养12h。最后把它们挑出放在血球计数板上于显微镜下检查孢子萌发情况[6]。看哪个抑制率最好,测定最适浓度。试验重复三次。 苦参提取液对小麦条锈病菌的抑菌作用(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_39707.html
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