1.材料与方法
1.1 实验材料
颗粒饱满的蚕豆种子。
1.2 仪器
紫外灯、离心机、电子天平等。
1.3 实验方法
1.3.1 氯化钙溶液配制
用电子天平称取一定量的氯化钙,配制出2mmol/L和6mmol/L的氯化钙溶液。
1.3.2蚕豆种子消毒、萌发及嫩苗的培养
用5%的次氯酸钠将蚕豆种子浸泡30min,清洗干净,浸泡24小时,将其分别移至铺有滤纸的托盘中,上面覆盖一层滤纸,在室温下培养,并喷洒蒸馏水催芽,培养4 d后,将蒸馏水改为培养液进行培养,直到长出4-6片叶子。
1.3.3实验处理设置
将长出4-6片真叶的蚕豆嫩叶分为1个对照组和6个处理组。对照组置于正常条件下培养;处理组1为蚕豆嫩苗每天紫外照射4 h,处理1 d;处理组2为蚕豆嫩苗紫外照射4 h,持续处理3 d;处理组3为蚕豆嫩苗每天紫外照射4 h,处理1 d,辐射结束后叶面喷洒浓度为2mmol/L的氯化对照组置于正常条件下培养;处理组4为蚕豆嫩苗每天紫外辐射4 h,处理1 d,辐射结束后叶面喷洒6 mmol/L CaCl2溶液;处理组5为蚕豆嫩苗每天紫外辐射4 h,连续处理3 d,辐射结束后叶面喷洒2 mmol/L CaCl2溶液;处理组6为蚕豆嫩苗每天紫外辐射4 h,连续处理3 d,辐射结束后叶面喷洒6 mmol/L CaCl2溶液。紫外辐射上午8:00开始,12:00结束,叶面喷洒CaCl2溶液中午12:00进行,喷洒时以叶面无液滴滴落为宜,注意每盘每次喷洒量保持一致。各处理组培养结束后将嫩苗恢复培养1 d,而后取叶片测定蚕豆嫩苗中游离脯氨酸含量、丙二醛(MDA)的生成量、可溶性蛋白合成量以及过氧化物酶(POD)活性等各项生理指标。
1.3.4生理指标测定方法
(1)叶绿素含量的测定
利用分光光度法[5]测定叶绿素合成量,用95%乙醇提取蚕豆嫩叶中的叶绿素,每个处理均设置重复(3个),叶绿素含量用平均值表示,下列所测指标表示方法相同。
(2)游离脯氨酸含量的测定
利用酸性茚三酮法[6]。
(3)丙二醛含量的测定
利用硫代巴比妥酸法[7]。
(4)可溶性蛋白含量的测定
利用考马斯亮蓝法[8]。
(6)过氧化物酶(POD)活性的测定
利用愈创木酚比色法[8]。
(7)可溶性糖含量的测定
利用蒽酮法[9-10]。
钙缓解紫外辐射对蚕豆幼苗的毒害效应研究(2):http://www.751com.cn/shengwu/lunwen_43611.html