营养液Ⅴ 5

营养液Ⅵ 5

1.2.2  DNA的提取

提取水稻F30定位群体各单株DNA，做好标记备用。DNA提取方法如下：

1） 用剪刀剪取水稻一段叶片约0.1-0.2g放在离心管内，加钢珠，加液氮冷却，用研磨仪研磨成粉末。

2） 加入400µlDNA提取液，混匀，75℃水浴10min，上下颠倒使其混和均匀再水浴10min。

3） 从水浴锅中取出离心管， 12000rpm离心10 min。

4） 吸取上清液（约300µl）到新的离心管中，弃沉淀。

5） 在离心管中加入2/3上清液体积的异丙醇*751`文~论|文/网www.751com.cn，混匀，并在4℃冰箱中放置5分钟。

6） 12000rpm离心10 min，倒出上清液，然后加入75%乙醇750µl进行洗涤，8500rpm离心5min，倒掉酒精，自然风干。

7） 向管中加入200µl的ddH2O溶液，冰箱保存。

提取试剂盒提取水稻DNA步骤： 

1）剪取水稻叶片0.1-0.2g放在离心管内，加钢珠，加液氮，用研磨仪研磨成粉末。

2）800µl Lysis Buffer，加入β-巯基乙醇至终浓度0.1%，65℃下混匀。

3）加入研磨好的粉末中，65℃水浴20min，其间颠倒混匀。

4）加入500μl氯仿，混匀。

5）12000rpm室温离心5min。

6）取上层清液，加入700μl Bind Buffer，混匀，转入离心柱中。

7）12000rpm离心1min，弃废液。

8）加入700μl Wash Buffer A（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min，。

9）弃废液，加入700μl Wash Buffer B（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1min。

10）弃废液，加入500μl Wash Buffer B，12000rpm离心1min，弃废液。

11）12000rpm离心2min，离心柱置于新的离心管中，打开盖，放置5-10min，至无乙醇。

12）加入70μl TE Buffer（65℃预热），置室温2-5min，12000rpm离心2min。