隆番茄前体和成熟SlmiR156基因全长；

2）构建PVX病毒介导的SlmiR156超表达载体：利用PVX载体上特异性酶切位点`751~文[论]文'网www.751com.cn，将上述克隆得到的SlmiR156前体和成熟体序列插入PVX载体，得到PVX介导的超表达载体；

3）烟草转化试验：将上述超表达载体经SpeI酶切后进行体外转录得到相应的mRNA，转化烟草并收集烟草发病叶片，冷冻干燥后于-80℃保存；

4）SlmiR156对番茄果实成熟的影响：将含有PVX病毒介导超表达的SlmiR156前体和成熟体的烟草病汁液通过果柄注射入番茄果实，以注射含PVX空载体的烟草病汁液和Elution Buffer为对照，比较观察实验组和对照组中番茄果实成熟后的表观形态的影响，初步得到SlmiR156在番茄果实后熟中的作用。

2 实验内容

2.1 实验材料与设备

2.1.1 实验材料与试剂

植物材料本氏烟（Nicotiana benthamiana, Nb）和番茄野生型（Ailsa Craig，AC）均为大学生命与环境科学学院植物RNA信号转导中心所有。本氏烟Nb和番茄野生型AC均种植在常年不间断运行的温室中，培养条件为16h光照/8h黑暗，温度25℃。

病毒载体PVX/HisG-MF1为杭州师范大学生命与环境科学学院植物RNA信号转导中心所有论文网，储存于DH5α中，-80℃保存；pEASY-Blunt simple T vector和大肠杆菌感受态DH5α购买于北京全式金生物有限公司；限制性内切酶ClaI和EagI购买于New England Biolabs(NEB)公司；DNA Marker（DL500、DL1000、DL2000、DL15000）和DNA聚合酶primerSTAR购买于TAKARA公司；植物RNA抽提试剂盒、PCR产物回收试剂盒、PCR产物割胶回收试剂盒和质粒抽提试剂盒等购买于QIAGEN公司；引物合成和测序由上海invitrogen公司提供；其他常规生化试剂，包括抗生素氨苄青霉素（Amp+）和LB培养基等均购买于上海生工生物有限公司。